中华人民共和国国家标准
乙醚萃取法
GB 12143.3-89
Determination method for L-ascorbic acid in fruit and vegetable juice beverages- Ethyl ether extraction method
1 主题内容与适用范围
本标准规定了使用2,6-二氯靛酚滴定-乙醚萃取法测定果蔬汁饮料中L-抗坏血到含量的方法。
本标准适用于浓缩果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁饮料、果蔬汁碳酸饮料及果蔬汁固体饮料中L－抗坏血酸的测定,尤其适用于深色果蔬汁饮料中L-抗坏血酸的测定。但不适用于脱氢抗坏血酸的测定。
2 引用标准
GB 601 化学试剂 标准溶液制备方法
GB 686 化学试剂 丙酮 HG 3-1002 化学试剂 乙醚
3 原理 本法根据氧化还原反应原理,2,6-二氯靛酚能被L-抗坏血酸还原为无色体,微过量的2,6-二氯靛酚用乙醚提取,然后由醚层中的玫瑰红色来确定滴定终点。
4 试剂 所用的试剂均为分析纯,所用的水均为蒸馏水或同等纯度的水(以下简称水)。
4.1 丙酮：符合 GB 686.
4.2 乙醚：符合HG 3-1002.
4.3 10%硫酸铜溶液：称取10g硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于水,并稀释至100ml.
4.4 2%草酸溶液：称取20g草酸(C2H2O4·2H2O)溶解于水,并稀释至1L. 1
4.5 0.1 mol/L(──I2)碘标准滴定溶液：按GB 601 第2章第10条配制与标定,贮存 2于棕色瓶中。 1 1
4.6 0.01 mol/L(─I2)碘标准滴定溶液：将0.1mol/L(─I2)碘标准滴定溶液在使用时 2 2 稀释V25mL→V250mL,浓度以C1表示。
4.7 0.88mg/mL抗坏血酸标准溶液：称取0.22g抗坏血酸,用2%草酸溶液(4.4)溶解并稀释到250mL。 标定：吸取抗坏血酸标准溶液20.00mL,加0.5%淀粉指示液(4.10)1mL,用0.01 mol/L( 1 ─I2)(4.6)碘标准滴定溶液滴定至呈微蓝色为止。
2 C1·V1
C2 = ─────-×88 ……………………………………(1)
20
式中：C2--L-抗坏血酸溶液的浓度,mg/mL;
C1--碘标准滴定溶液的浓度,mol/L;
V1--标定时所用碘标准滴定溶液的体积,ml;
1 88--1 mL 1 mol/L(───I2)碘标准滴定溶液相当于L-抗坏血酸的毫克数。 2
4.8 0.088 mg/ML L-抗坏血酸标准溶液：吸取0.88 mg/mL L-抗坏血酸标准溶液(4.7) 25.00mL,用2%草酸溶液稀释,V25mL→V250mL.注：4.7和4.8的L-抗坏血酸溶液在使用时配制。
4.9 2-6-二氯靛酚标准滴定溶液：称取200mg,2,6-二氯靛酚,用少量热的重蒸馏水湿润,然后再慢慢加入热的重蒸水,搅拌溶解,过滤。冷却后,滤液用重蒸馏水稀释到1L.保 存于冰箱中。一星期至少标定一次。标定：吸取10.00mL L-抗坏血酸标准溶液(4.8)置于50mL比色管中,按测定样品的步 骤标定2.6-二氯靛酚溶液的滴定度。
m
F = ── …………………………………………(2)
V
式中：F--2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即 1 mL 2,6-二氯靛酚溶液相当于L-抗坏血酸的毫克数,mg/mL;
m--10 mL
L-抗坏血酸标准溶液中含抗坏血酸的量,mg;
V--标定时所用2.6-二氯靛酚溶液的体积,mL.
4.10 5g/L淀粉指示液：称取0.5g可溶性淀粉,用5mL冷水调匀,将所得乳浊液在搅拌下徐徐注入100 mL沸腾着的水中,再煮沸2～3min,使溶液透明。加0.1g碘化汞作保存剂。
5 仪器 实验室常用仪器及下列各项：
5.1 10 mL微量滴定管。
5.2 50 mL 100mL比色管。
5.3 125 mL分液漏斗。
6 试液的制备 水果、蔬菜中抗坏血酸的含量见附录 A。
6.1 浓缩汁 在浓缩汁中加入与在浓缩过程中失去的天然水分等量的水,使成为原汁。然后同原汁 一一样取一定量样品,稀释、混匀供测。
6.2 原汁 称取含抗坏血酸4～10 mg有代表性的样品（精确到0.001g）,用2%草酸溶液稀释到200 mL,混匀供测。
6.3 果汁饮料、果蔬汁水
6.3.1 抗坏血酸含量在0.05mg/mL以下的样品,混匀后直接取样测定。
6.3.2 抗坏血酸含量在0.05mg/mL以上的样品,称取含抗坏血到4～10mg有代表性的样品（精确到0.001g）,用2%草酸溶液稀释到200mL,混匀供测。
6.4 果蔬汁碳酸饮料 先将样品旋摇到基本无气泡后,按6.3条制备。
6.5 固体饮料 称取含抗坏血酸4～10mg有代表性的样品(精确到0.001g),用2%草酸溶液溶解并稀释 至200mL,混匀供测。
6.6 乙醚抽提处理 对于高度乳化或样液色泽较深且易被乙醚抽提的样品,取样后置分液漏斗中。加30mL乙醚,充分振摇但勿使之乳化。待分层后将下层样液放入200mL容量瓶中,分液漏斗中加入 20mL2%草酸溶液。适当振摇,待分层后,将下层水溶液放入上面的200mL容量瓶中。如此反复操作4次,将每次的下层水溶液均放入200mL容量瓶内,然后用2%草酸溶液稀释至刻度
6.7 空白试液的制备 按试液制备中所确定的取样量称取同一样品(精确到0.001g),置于250mL锥形瓶中,加 20mL10%硫酸铜溶液,加水使总体积约为100mL,置于垫有石棉网的电炉上,小心加热至沸并 保持微沸15min,然后用流动水冷却到室温。将此溶液转移到200mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,供空白测定。
7 分析步骤
7.1 试液的制定 取10～15支50mL比色管,在每支比色管中加入10.00mL按第6章制备好的试液,各加2. 5mL丙酮。放置3min后,在第一支比色管中加入1 mL2,6-二氯靛酚溶液,充分混匀,精确控制40s后,加入2 mL乙醚,充分振摇,放置几分钟,待乙醚与水溶液分层后,观察醚层有无 出现玫瑰红色。当出现淡玫瑰红色时,则表明已达到测定的暂定终点。如果2,6-二氯靛酚 全部被抗坏血酸还原,乙醚层保持无色,则在第二支比色管中加入1.5mL 2,6-二氯靛酚溶 液。如还不显红色,再逐一按2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0mL的量加入2,6-二氯靛 酚溶液,直到乙醚层出现玫瑰红色达到暂定终点为止。这时所加的2,6-二氯靛酚的量常常 是过量的,所以需进一步试验,确定精确的终点。如果加到3.0mL2,6-二氯靛酚溶液时出现玫瑰红色,则从第六支加有试液的比色管中开始分别加入2.6、2.7、2.8、2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液,直至呈现淡玫瑰红色为止。如在2.9mL刚呈红色,则2.9mL为精确终点。如加到2.9mL 2,6-二氯靛酚溶液仍不显玫瑰红色,则上面的3.0mL就是精确终点。所用2,6-二氯靛酚溶液为α毫升。对于抗坏血酸含量低于2mg/100g的样品,用100mL比色管直接加倍取样测定。丙酮与乙醚的加量也相应加倍,操作同上。对于同一个被测样液需平行测定三次。
7.2 空白试液的测定 吸取空白试液10.00mL于比色管中,同7.1加丙酮并逐一按0.05、0.10、0.15、0.20mL 的量加入2,6-二氯靛酚溶液,测得在乙醚层中刚呈现玫瑰红色所需的2,6-二氯靛酚溶液的 量为b毫升。
8 结果的表示
8.1 计算
(a-b)×F
X = ─────×100……………………………………(3)
m
式中：X--100g(或mL)样品所含L-抗坏血酸的毫克数,mg/100g(或mL);
a--测定试液时所需2,6-二氯靛酚溶液的体积,mL;
b--测定空白试液时所需2,6-二氯靛酚溶液的体积,mL;
f--2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,mg/mL,即每mL此溶液相当于L-抗坏血酸的mg数；
m--10 mL试液中所含样品的量,g(或mL). 注：以误差在允许范围内的三次测定结果的算术平均值报告结果,精确到小数点后第一位。
8.2 允许误差 同一样品三次测定结果的相对偏差为：其抗坏血酸含量大于或等于10mg/100g的样品应小 于2%,含量小于10mg/100g的样品应小于5%.
附 录 A 水果、蔬菜中抗坏血酸含量 （参考件）
表 A1 mg/100g
名 称 含 量 名 称 含 量 名 称 含 量
葡 萄 1～2 荔 枝 3～30 番 茄 8～33
柚 39～51 龙 眼 60 南 瓜 7～14
沙田柚 123 枇 杷 16 冬 瓜 8～18
甜 橙 54 无花果 1 黄 瓜 4～14
橙 37 桑葚（白） 5 苦 瓜 16～84
柑 桔 34 桑葚（紫） 19 青 豆 24
柠 檬 40 香 蕉 6～19 菜 豆 6～14
苹 果 微～ 2 菠 罗 7～24 胡萝卜 6～19
沙 果 1 椰子（肉） 2 白萝卜 11～37
海 棠 2 椰子（水） 2 红萝卜 11～27
梨 1～4 橄 榄 21 青萝卜 16～31
桃 3～10 栗 子 60 心里美萝卜 34
杨 桃 8～18 莲 子 17 莲 藕 37～55
杏 7～10 芒 果 21～41 卷心菜 60
李 1 菱 5 苋菜（红） 38～48
草 莓 35 刺 梨 25～85 雪里蕻 83
樱 桃 3～11 猕猴桃 213 芹 菜 6～41
番石榴 28～74 西 瓜 3～7 柿子椒 56～114
枣 540 甜 瓜 7～15 山 楂 89
哈蜜瓜 13
注：本表摘自《食物成分表》,1985年版,中国医科院卫生研究所编。
附加说明：
本标准由中华人民共和国轻工业部提出。
本标准由轻工业部食品发酵工业科学研究所技术归口。
本标准由轻工业部食品发酵工业科学研究所负责起草。
本标准起草人龚玲娣、徐清渠。
国家技术监督局1989-12-29批准 1990-10-01实施
