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改良番茄汁琼脂培养基基础

时间:2016/3/10 15:13:00 来源:网友

改良番茄汁琼脂培养基基础        (Modified Tomato Juice Agar Base)

用    途:

用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T16347-1996,GB/T4789.35-2003和SN/T1941.1-2007)。

原    理:

番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质;牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子,其成分还能抑制某些杂菌;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升):

酵母膏粉   5g

牛肉膏粉     10g

乳糖   20g

葡萄糖   2g

磷酸氢二钾   2g

吐温-80   1g

乙酸钠 5g

琼脂 15g

最终pH 6.8±0.2

使用方法:

1、切碎洗净的新鲜番茄,放入三角瓶,置4℃冰箱8—12h,取出后用纱布过滤。称取本品60g,加入950 ml蒸馏水或去离子水和50ml番茄汁,搅拌加热煮沸至完全溶解,校正pH后分装三角瓶,121℃高压灭菌15min。

2、无菌操作将经过充分摇匀的检样25g(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内,振摇均匀,即为1:10稀释液,依次做1:100、1:1000……稀释。

3、选择2—3个合适的稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。

1、 将培养基凉至50℃左右,将培养基注入平皿中约15mL,待琼脂凝固后,翻转平板,置于36±1℃温箱中培养72±3h。

2、 选择菌落数在30—300个之间的平皿进行计数。计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽孢的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌落计算出该皿内的乳酸数,然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如,检样10-4的稀释液在改良TJA培养基平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实为乳酸菌的是4个,则1 mL检样中乳酸菌数为:


质量控制:

下列菌株接种后于36±1℃培养72h结果如下:

菌    名   菌    号 生长状况 生长特征

保加利亚乳杆菌 As1.1482 良好     平皿底为黄色,菌落中等大小,微白色,湿润,边缘不整齐,直径3±1mm,如棉絮团状菌落

乳链球菌 良好 平皿底为黄色,菌落光滑,微白色,湿润,边缘整齐

贮    存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规    格:250g

参考文献:

1.GB/T4789.35-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验标准 乳酸菌检验

2.GB/T16347-1996 中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验

3.SN/T1941.1-2007中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分 分离与计数方法。


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