脑—心浸萃琼脂培养基 (Brain Heart Infusion Agar)
用 途:
广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养,包括营养要求较高的微生物的培养,特别用于矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验(GB/T 8538-2008和CJ/T148-2001)。
原 理:
月示胨和脑—心浸粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖可为多种细菌提供能源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂。
配方(每升):
幼牛脑(提取浸出粉) 200g
牛心(提取浸出粉) 250g
葡萄糖 2g
氯化钠 5g
月示 胨 10g
磷酸氢二钠 2.5g
琼脂 15g
最终pH7.4±0.2
使用方法:
1. 称取本品51g,加入1000 mL蒸馏水或去离子水,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装试管,121℃灭菌15分钟,做成斜面培养基。
2. 从滤膜上挑取典型菌落,接种到脑—心浸萃琼脂培养基斜面上,在35±0.5℃培养24—48 h。
3. 挑取典型培养物到一片清洁的载玻上,加几滴新鲜的3%的过氧化氢到载玻片的涂抹菌液上,如果没有气泡发生,就显示过氧化氢酶反应为阴性,则菌落可视为粪链球菌,就应该继续如下确证过程。如果有气泡发生,则过氧化氢酶反应为阳性,因此菌落不属于粪链球菌确证试验至此即可结束。
4. 以接种环从脑-心浸萃琼脂培养基上转移一典型菌落到脑-心浸萃液态培养基内,在45℃培养48h。此外也要同时转移一典型菌落到胆汁液态培养中,在35℃培养72h。这种培养基是以无菌的10%牛胆汁加入到60mL无菌的脑-心浸萃液态培养基中面配成。
5. 转移到上述培养之后,若是菌落能得到繁殖,则表示结果为阳性。
6. 计数结果。
菌数/ 100mL = N / V × 100
N——经证实的粪性链球菌菌落数
V——过滤的水样体积(mL)
质量控制:
质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h,结果如下:
菌 名 菌 号 生长状况
粪性链球菌 CMCC(B)32223 良好
乙型溶血性链球菌 CMCC(B)32210 良好
大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好
贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格:100g
参考文献:
1. CJ/T148-2001 中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水水质检验 粪性链球菌检测
2. GB/T 8538-2008 中华人民共和国国家标准 饮用天然矿泉水检验方法