甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础（MYP） (Mannitol Yolk Polymyxin Agar Base)
用 途：
用于蜡样芽孢杆菌的菌数测定及分离培养(GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92和SN/T2206.2-2009，ISO标准)。
原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子；D—甘露醇为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；酚红为pH指示剂；卵黄含有卵磷脂，蜡样芽孢杆菌产生卵磷脂酶，在菌落周围产生沉淀环；并发酵D—甘露醇产酸使菌落显黄色；多粘菌素B可抑制杂菌的生长。
配方（每升）：
蛋白胨 10g
牛肉膏粉 1g
D—甘露醇 10g
氯化钠 10g
琼脂 15g
酚红 0.025g
最终pH7.4±0.2
使用方法： （平板计数法）1、称取本品46g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，每瓶100mL，121℃灭菌15分钟。
2、 用时加热溶化琼脂，冷至50℃后，每100mL培养基基础中加入配套试剂1支 (SR0170)( 多粘菌素B10000IU) 和50%卵黄液5mL，混匀后倾注灭菌培养皿。
3、 样品的制备。
以无菌操作将检样25g（mL）用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1—10-5的稀释液。
4、 取各稀释液0.1mL接种到MYP琼脂平板上，用灭菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面。每稀释度接种两个MYP琼脂平板。
5、 将平板置于36±1℃培养12—20h。
6、 选取适当菌落的平板进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。
蜡样芽孢杆菌在MYP平板上生成的菌落为粉红色，环绕产生卵磷脂酶沉淀环。如反应不典型，可继续培养24h再计数。
7、 计数后从每个平板上选取5个已计数的菌落，按有关操作进行证实实验。
8、 根据证实实验确定为蜡样芽孢杆菌的菌落数，按比例计算出该皿内的蜡样芽孢杆菌菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（或mL）样品所含蜡样芽孢杆菌数。例如MYP平板的可疑菌落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数（如10-4），再乘上1 g（或mL）检样数（取的是0.1mL样）则为：25×4／5×10-4×10＝2×106
附： 50%卵黄液: 取鲜鸡蛋，用硬刷将蛋壳彻底洗净，沥干，放于70%酒精溶液中浸泡1h，以无菌操作取出卵黄，加入等量灭菌生理盐水，混匀后备用。
质量控制：
质控菌株接种后于36±1℃培养24h，结果如下。
菌 名 菌 号 生长状况 培养特征
蜡样芽孢杆菌 CMCC(B)63303 良好 菌落粉红色，周围有较大沉淀环
枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 良好 黄色菌落，无沉淀环
大肠埃希氏菌 ATCC25922 不生长 ——
贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格：250g
参考文献:
1. GB/T 4789.14-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 蜡样芽孢杆菌
2. GB/T 4789.28-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 染色法,培养基和试剂
3. SN 0176-92 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法
4. SN/T2206.2-2009 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 化妆品微生物检验方法 第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌
5 ISO7932：2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus-----Colony-count technique at 30℃
