高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
历史
1906年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromotography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。他在论文中写到：
“（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”
1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。
1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。
1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。
1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。
1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。
1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。
特点
高效液相色谱法有“四高一广”的特点：
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
主要类型
1．吸附色谱(Absorption Chromatography)
2．分配色谱(Partition Chromatography)
3．离子色谱(Ion Chromatography)
4．体积排阻色谱(Size Exclusion Chromatography)
5．亲和色谱(Affinity Chromatography)
结构
综述
高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。
技术动态
液相色谱和质谱连接，可以增加额外的分析能力，能够准确鉴定和定量像细胞和组织裂解液，血液，血浆，尿液和口腔液等复杂样品基质中的微量化合物。高效液相色谱质谱系统（ABSciex
Eksigent LC / MS和LC / MS / MS）提供了一些独特的优势，包括：
快速分析和流转所需的最少样品准备
高灵敏度并结合可分析多个化合物能力，甚至可以跨越化合物的种类
高精确度，高分辨率鉴定和量化目标分析物
高压输液泵
功能
驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；
性能要求
流量稳定（±1)，耐高压(30～60Mpa)，耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；
种类
往复泵和隔膜泵。
色谱柱
功能
分离样品中的各个物质；
尺寸
10～30cm长，2～5mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；
填料粒度
5 ～ 10μm ，高效微粒固定相；
进样器
功能
将待分析样品引入色谱系统；
种类
①注射器，10Mpa以下，1～10μm微量注射器进样
②停流进样
③阀进样，常用、较 理想、体积可变，可固定
④自动进样器，有利于重复操作，实现自动化
检测器 功能
将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号；
分类
①示差折光化学检测器
②紫外吸收检测器
③紫外一可见分光光度检测器
④二极管阵列紫外检测器
⑤荧光检测器
⑥电化学检测器
馏分收集器
功能
如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的；
方法
①手工，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。
②馏分收集器收集，比较理想，微机控制操作准确。
数据获取和处理系统
功能
把检测器检测到的信号显示出来。
