肉与肉制品 维生素E含量测定

中华人民共和国国家标准
肉与肉制品 维生素E含量测定
GB/T 9695.30-91
Meat and meat products-Method for determination of vitamin E content

1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉与肉制品中α-维生素E含量的测定。
本标准适用于肉与肉制品中α-维生素E含量的测定。
2 引用标准 GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法
3 原理 样品皂化后,用石油醚提取不皂化物中的维生素E,浓缩后,用高效液相色谱仪分离测定维生素E,用标准外标法计算样品中维生素E的含量。
4 试剂 除特别标明外所用试剂均为分析纯,所用水均为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 氢氧化钾（GB 2306）：50％溶液；
4.2 抗坏血酸，10％溶液;
4.3 无水乙酸(GB 678);
4.4 石油醚:沸程30～60℃;
4.5 无水硫酸钠;
4.6 异丙醇;
4.7 甲醇(GB 683):重蒸后使用;
4.8 α-维生素E标准溶液:0.5mg/mL,100μg/mL称取α-维生素E标准品25.0mg,用异丙醇稀释至50mL棕色容量瓶中。再稀释成100μg/mL的溶液。
5 仪器和设备
5.1 实验室常规设备;
5.2 绞肉机：孔径不超过4mm;
5.3 旋转蒸发器;
5.4 液相色谱仪,带紫外或荧光检测器;
5.5 十八烷基键合固定相柱或其他能分离维生素E的色谱柱。
6 试样
6.1 按GB 9695.19取样。
6.2 取有代表性的,去除不可食部分的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其混匀,试样应尽快分析。
7 分析步骤
7.1 皂化 维生素E易被氧化,实验应避光或充氮操作,并使用棕色玻璃仪器。称取2～10g试样于150mL棕色皂化瓶中加入10％抗坏血酸溶液3mL,50％氢氧化钾溶液5mL,无水乙醇30mL,混匀,于沸水浴上回流15～30min,使试样溶液清澈,完全皂化后于流水中冷却。
7.2 提取 将皂化后的试样溶液移入125mL分液漏斗中,用30mL石油醚分数次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中,塞上塞子,轻摇分液漏斗,避免乳化。静置，待分层后，将水层放入第二个分液漏斗中，醚层留在第一个分液漏斗中，于第二个分液漏斗中倒入10mL石油醚,进行第二次提取,如此进行3～4次,石油醚层并入第一个分液漏斗中。石油醚层反复用水洗涤，直至水层不呈碱性(用pH试纸检查)为止，弃去水层。将分液漏斗中石油醚层经过无水硫酸钠脱水，滤入干燥的棕色圆底烧瓶中，再用石油醚洗涤无水硫酸钠和分液漏斗，洗液并入前棕色圆底烧瓶中。
7.3 分析试样的准备 将盛有石油醚提取液的圆底烧瓶与旋转蒸发器连接,于50～60℃水浴上减压回收石油醚,待瓶内只剩约1～2mL液体时，取下烧瓶,用氮气吹干剩余液体，立即加入2.0mL异丙醇 溶液,摇匀,溶解瓶中维生素E,塞上塞子,以防溶剂挥发。此为色谱分析样液。
7.4 测定
7.4.1 维生素E标准曲线的绘制 取α-维生素E标准溶液(100μg/mL)2、4、6、8、10μL进行高效液相色谱(HPLC)分析,记录峰面积或峰高,以维生素E量为横坐标,峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
7.4.2 色谱分析参考条件 分析柱:十八烷基键合固定相柱或同等效用的色谱柱; 流动相:甲醇; 检验器:紫外检测器波长292nm; 荧光检测器Ex:298nm,Em:325nm; 进择器:试样液6～10μL,记录峰高或峰面积。
8 分析结果的计算
　　　　　　A×1 000×V0
　　　X = ───────×100
　　　　　V1×m×1 000
式中:X--样品中维生素E含量,mg/100g;
A--根据试样的峰面积或峰高查标准曲线得到的维生素E的量,μg;
V1--试样液进样分析的体积,μL;
Vo--试样最终稀释的体积,mL;
m--称样质量,g。
当符合允许差的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果。
9 允许差 同一样品同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的30％。

附加说明:
　　　 本标准由中华人民共和国商业部提出。
　　　 本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
　　　 本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。
　　　 本标准主要起草人王津生、杨学武。

国家技术监督局1991-03-26批准 1991-12-01实施