中华人民共和国国家标准
GB/T 9695.28-91
Meat and meat products-Method for determination of vitamin B2 content
1 主要内容与适用范围 本标准规定了肉与肉制品中维生素B2的测定方法。
本标准适用于肉与肉制品中维生素B2含量的测定。
2 引用标准 GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法
3 原理 试样用稀酸经121～123℃高压釜处理,提取维生素B2(核黄素),维生素B2在中性或酸性溶液中经照射产生蓝色荧光,荧光强度与维生素B2的浓度成正比,以此测定维生素B2的含量。
4 试剂
4.1 盐酸(GB 622):0.1mol/L溶液;
4.2 氢氧化钠(GB 629):1 mol/L溶液;
4.3 冰乙酸(GB 676):0.02 mol/L溶液;
4.4 冰乙酸(GB 676);
4.5 高锰酸钾(GB 643):4％溶液;
4.6 3％过氧化氢(GB 6684):3％溶液;
4.7 连二亚硫酸钠;
4.8 维生素B2标准溶液
4.8.1 标准贮备液100μg/mL: 将50.0mg维生素B2标准品溶于0.02mol/L乙酸溶液中并定容至500mL棕色容量瓶中。( 可在水浴上加热溶解,冷却后再定容。)
4.8.2 标准工作液0.05μg/mL: 吸取标准贮备液1.00mL于100mL棕色容量瓶中定容、摇匀。吸取此液5.00mL于100mL 棕色容量瓶中用水定容、摇匀，用时现配。
5 仪器和设备
5.1 实验室常用设备;
5.2 绞肉机:孔径不超过4mm;
5.3 高压釜:温度可控制在121～123℃;
5.4 荧光分光光度计。
6 试样
6.1 按GB 9695.19取样。
6.2 取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其混匀,贮于密闭容器中备用。
7 分析步骤
7.1 试样前处理 称取5g(精确到0.001g)试样于250mL具塞锥形瓶中,加入0.1mol/L盐酸溶液10mL,塞好 瓶盖用力振摇,使试样与酸混匀,再用0.1mol/L盐酸溶液冲洗瓶壁,总体积约为60mL。将锥形瓶放入121～123℃高压釜中加热30min,取出冷却至室温。用1mol/L氢氧化钠溶液调pH为4.0～4.5(用精密pH试纸检查)使蛋白质沉淀。将其全部转移到500mL棕色容量瓶中定容、摇匀、过滤，滤液避光备用。
7.2 测定 吸取备用滤液,维生素B2标准工作液各10.00mL分别加入25mL棕色试管中,加入冰乙酸1mL。在不断摇动下加4％高锰酸钾溶液4滴,使溶液显紫色,静置2min。然后再滴加3％过氧化氢溶液2滴,摇匀使紫色在10s内退去。在激发波长440nm,发射波长565nm处测定其荧光强度I和I’在各试管中分别加入连二亚硫酸钠20mg,轻摇,10s内测其最小荧光强度Q和Q’。
8 分析结果的计算 计算公式:
I-Q c×500×10**(-3)
X = ───- × ─────────×100
I’-Q’ m
式中:X--样品中维生素B2含量,mg/100g;
I--试样的荧光强度;
I’--维生素B2标准的荧光强度;
Q--试样加连二亚硫酸钠后的荧光强度;
Q’--维生素B2标准加连二亚硫酸钠后的荧光强度;
c--维生素B2标准工作液的浓度,μg/mL;
m--试样质量,g。
当符合允许差规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,精确到0.01mg/100g。
9 允许差 同一样品同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的20％。
附加说明:
本标准由中华人民共和国商业部提出。
本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。
本标准主要起草人焦烨、苏真。
国家技术监督局1991-03-26批准 1991-12-01实施
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