中华人民共和国国家标准
肉与肉制品 维生素A含量测定
GB/T 9695.26-91
Meat and meat products-Method for determination of vitamin A content
1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉和肉制品中维生素A含量的测定方法。 本标准适用于肉和肉制品中维生素A含量的测定。
2 引用标准 GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法
3 原理 样品皂化后,用石油醚提取不皂化的维生素A,浓缩后,用高效液相色谱荧光检测器, 激发波长340nm,发射波长460nm,分离测定维生素A,用标准外标法计算样品中维生素A的 含量。
4 试剂 除特别标明外所用试剂全为分析纯,所用水应为蒸馏水或同等纯度的水。
4.1 氢氧化钾(GB 2306):50％溶液;
4.2 抗坏血酸:10％溶液;
4.3 无水乙醇(GB 678);
4.4 石油醚:沸程30～60℃;
4.5 无水硫酸钠;
4.6 异丙醇;
4.7 甲醇(GB 683):重蒸后使用;
4.8 维生素A标准溶液:0.2mg/mL 称取维生素A标准品10.0mg,用异丙醇溶解,移至50mL棕色容量瓶中,用异丙醇稀至刻度。 当天配制。
5 仪器和设备
5.1 实验室常规设备;
5.2 绞肉机:孔径不超过4mm;
5.3 旋转蒸发器;
5.4 液相色谱仪,带荧光检测器;
5.5 色谱柱:十八烷基键合固定相柱或其他能分离维生素A的柱子。
6 试样
6.1 按GB 9695.19取样。
6.2 取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其混匀,试样应尽快分析。
7 分析步骤
7.1 皂化 维生素A易被光破坏,试验应避光操作。 称取0.5～5g试样于150mL棕色皂化瓶中,加入10％抗坏血酸溶液5mL,50％氢氧化钾 溶液15mL,乙醇30mL混匀,于80℃水浴上回流加热30～60min,使试样溶液清澈,完全皂化 后于流水中冷却。
7.2 提取 将皂化后的试样溶液移入125mL分液漏斗中,用30mL石油醚分数次洗皂化瓶,洗液并入 分液漏斗中,塞上塞子,轻摇分液漏斗,避免乳化。静置,待分层后,将水层放入第二个分液 漏斗中,醚层留在第一个分液漏斗中。于第二个分液漏斗中倒入10mL石油醚,进行第二次提 取,如此进行3～4次,石油醚层交入第一个分液漏斗中。 石油醚层反复用水洗涤,直至水层不呈碱性(用pH试纸检查)为止,弃去水层。将分液 漏斗中石油醚层经过无水硫酸钠脱水,滤入干燥的棕色圆底烧瓶中。再用石油醚洗涤无 水硫酸钠和分液漏斗,洗液并入棕色圆底烧瓶中。
7.3 分析试样的准备 将盛有石油醚提取液的圆底烧瓶与旋转蒸发器连接,于50～60℃水浴上减压回收石油 醚,待瓶内只剩约1～2mL液体时,取下烧瓶,用氮气吹干剩余液体，立即加入2.0mL异丙醇 溶液,摇匀,溶解瓶中维生素A,塞上塞子,以防溶剂挥发,此为色谱分析样液。
7.4 测定
7.4.1 维生素A标准曲线的绘制 取维生素A标准溶液1,2,3,4,5,6,7,8mL进行高效液相色谱(HPLC)分析,记录峰面积或 峰高,以维生素A量为横坐标,峰高或峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 若样品中维生素A含量很低,可取维生素A标准溶液(0.2mg/mL)5mL,用异丙醇溶液定容 至50mL容量瓶中,此标准溶液浓度为0.02mg/mL。 如前进行高效液相色谱(HPLC)分析,绘制标准曲线。
7.4.2 色谱分析参考条件 分析柱:十八烷基键合固定相柱式相同效用的柱; 流动相:甲醇/水 98/2; 流动相流速:1 mL/min; 检测器:荧光检测器Ex:340nm, Em:460nm; 进样量:试样液4～6μL,记录峰面积或峰高。
8 分析结果的计算
A×1 000×V0
计算公式 X = ────────×100
V1×m×1000
式中:X--样品中维生素A含量,mg/100g;
A--根据试样的峰面积或峰高查标准曲线得到维生素A的量,μg;
V1--试样进样分析的体积,μL;
V0--试样最终稀释的体积,mL;
m--称样质量,g。 当符合允许差规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果。
9 允许差 同一样品同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的30
附加说明:
本标准由中华人民共和国商业部提出。
本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。
本标准主要起草人王津生、蒲健
国家技术监督局1991-03-26批准 1991-12-01实施
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