肉与肉制品胆固醇含量测定

中华人民共和国国家标准
肉与肉制品胆固醇含量测定
GB 9695.24-90
Meat and meat products-Method for determination of cholesterol

1 主题内容与适用范围
本标准规定了肉与肉制品中胆固醇含量的测定方法。
本标准适用于肉与肉制品中胆固醇含量的测定。
2 引用标准
GB 9695.1 肉与肉制品 游离脂肪含量的测定
3 原理 肉与肉制品中的脂类经皂化后,胆固醇作为不皂化物被提取出来,并与一定量的内标物混合后一起注入气相色谱柱,求出胆固醇与内标物的峰面积比,根据工作曲线计算胆固醇的重量,以求得肉与肉制品中胆固醇含量。
4 试剂 所用水均为蒸馏水或相当纯度的水。
4.1 无水乙醚。
4.2 氯仿(GB 682)。
4.3 1 mol/L氢氧化钾(GB 2306)/乙醇(GB 678)溶液。
4.4 无水硫酸钠。
4.5 胆固醇:1.0mg/mL氯仿溶液。
4.6 内标溶液:
4.6.1 5-α胆甾烷/氯仿标准溶液:1.0mg/mL。
4.6.2 菜油醇/氯仿标准溶液:3.0mg/mL。
4.6.3 胆固醇与5-α胆甾烷混合液:上述两种标准液等体积混合。
5 仪器和设备
5.1 实验室常规仪器。
5.2 气相色谱仪,配有FID检测器。
6 试样 按照GB 9695.1得到的脂肪。
7 分析步骤
7.1 不皂化物的提取 称取1.00g脂肪,置于10mL容量瓶中用氯仿定容并摇匀。准确量取该试液1～5mL、置于25mL具塞试管中,准确加入0.5～1mL内标物溶液(4.6.1),然后将氯仿蒸干。加入1mol/L 氢氧化钾溶液5mL,装上冷凝管,在85～95℃水浴上缓缓皂化1h。取下冷却至室温,全部移入50mL分液漏斗中,用水10mL洗具塞试管,洗液并入分液漏斗,加乙醚10mL轻轻振摇,静置分层后,将水相放入原试管中,加乙醚10mL振摇,待分层后,将乙醚移入分液漏斗内。再用10mL乙醚提取一次,此时分液漏斗中共有30mL溶液。用水2～3mL洗涤乙醚液,分层后,弃去水相,用无水硫酸钠10g干燥后,将乙醚层移入另一具塞试管中,通氮气吹干后,加入乙醇1mL。
7.2 色谱条件
7.2.1 色谱分离条件选择:对胆固醇峰要求其理论塔板数不少于1 600;胆固醇与菜油醇二者峰分辨率不小于2.2;胆固醇的保留时间在8～12min之间;胆固醇峰强度为满量程的0.25～ 0.5。
7.2.2 2％OV-1/chromosorb W(60～80目)φ3mm×2m。
7.2.3 柱温:260℃。
7.2.4 进样口及检测器温度:300℃。
7.2.5 载气(高纯氮)流速:60mL/min。
7.3 工作曲线制作
7.3.1 不同配比的胆固醇与5-α胆甾烷混合标准液:


序 号 1 2 3 4 5 6 7 8
胆固醇, mg 0.55 0.88 1.10 0.55 0.88 1.10 1.10 2.20
5-α胆甾烷,mg 0.55 0.55 0.55 1.10 0.10 1.10 1.15 1.55

以表中所列举的不同组合的胆固醇标准液和5-α胆甾烷混合样品置于具塞试管中,将溶剂通氮气吹干后,加入1mL乙醇,取1～3μL注入色谱柱中。从所得到气相色谱图求出胆固醇和5-α胆甾烷各峰的面积比，以峰面积比为纵坐 标，质量比为横坐标，制作工作曲线，此线斜率的倒数为K值。
7.3.2 试样的气相色谱分析。
8 分析结果的计算
　　　A1/A2×k×Wt
X = ───────×fat％×100
　　　　　W
式中:X--样品中胆固醇含量,mg/100g;
A1--胆固醇的峰面积;
A2--5-a胆甾烷的峰面积;
k--由工作曲线求得的胆固醇和5-a胆甾烷的质量比与峰面积比的比值;
Wt--脂类试样中添加的内标物的质量,mg;
fat％--样品中脂肪的含量；
W--脂肪质量,g 。
当符合允许差的要求时,取两次测定的算术平均值作为结果,精确至0.1mg/100g。
9 允许差 同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的10％。

附加说明:
　　　 本标准由中华人民共和国商业部提出。
　　　 本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。
　　　 本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。
　　　 本标准主要起草人鲁红军、刘小东、蒲健。

国家技术监督局1990-11-15批准 1991-10-01实施