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丁香和桂皮提取物对果蔬抑菌效果的影响

时间:2006/4/6 10:44:32 来源:中国食品添加剂应用网

    新鲜果蔬易受病原微生物侵染而腐败变质,果蔬的采后防腐保鲜已成为全世界的重点研究内容。化学防腐剂以其使用简便、效果显著而被广泛应用。但是,随着科学知识的普及,人们对于化学合成物质对人体的危害已有了一定的认识。天然防腐剂的研究与开发利用正是目前市场和消费者的迫切需要。中草药具有药食兼备、作用持久等优势,其中有部分中草药经长期实验和现代微生物手段证明,均能阻止病原微生物的生长,属理想的天然抑菌防腐材料。笔者对丁香、桂皮提取液和抑菌效果进行了研究和比较。为开发天然食品防腐保鲜剂提供理论依据。

    1、材料和方法

    1.1菌种来源

    黑曲霉菌、米曲霉菌、酵母菌均来自山西大学生物工程实验室。

    1.2 中草药来源

    丁香、肉桂、高良姜、乌梅、知母均购自中药材商店;芥菜籽购自农资市场。

    1.3 培养基

    1.3.1察氏培养基蔗糖30g;NAN032g;KCI 5 g;K~HP04·3HzD 1g;FeSO4·7H20O.O1g;MgSO4·7HzD0_5g;琼脂15-20g;水1000mL。

    1.3.2 麦芽糖培养基蛋白胨10g;麦芽糖20g;酵母膏5 g;琼脂15-18 g;蒸馏水1 000mL。

   
1.4 菌悬液制备

    1.4.1 霉菌菌悬.液 将米曲霉和黑曲霉用划线方法接种于察氏固体培养基上,在27℃下培养一周,使其分离成米粒大小的单个菌落。将单个菌落移种于察氏液体培养基中,在27℃下恒温摇菌7天。离心分离,弃去上清液。加少量无菌水,用超声波打碎,使其形成一定浓度的菌悬液。该试验使用的菌悬液浓度用450 nm 吸光值来标定,黑曲霉为0.157,米曲霉为0.216。

    1.4.2 酵母菌菌悬液取酵母菌活化,分离,于麦芽糖液体培养基中,在28℃恒温下摇菌28 h。使其形成一定浓度的菌悬液。

   
1.5 中草药提取液制备

    将洗净晾干的供试中草药样品粉碎,用40目筛过滤。用75% 的乙醇配成固液比为1:4的浸提体系, 于78℃的水浴中提取4h。过滤,取上清液,常温保存。

   
1.6 抑菌实验(平板对峙培养)

    1.6.1 霉菌抑菌实验方法将固体察氏培养基溶化高压灭菌后倒入平皿,待冷却凝固后,对称插入两个已灭菌的直径为1 em的接种环。于培养皿两个接种环中间的部位接入10 uL菌悬液,在28℃恒温培养箱中培养2天。待霉菌长成1 em左右的菌株后,将200 uL中药提取液加入接种环内,同时做无菌水和75% 乙醇的空白对照。28℃恒温下培养,随时观察。

    1.6.2 酵母菌抑菌实验方法将固体麦芽糖培养基溶化高压灭菌后倒入平皿,待冷却凝固后,接入50 uL菌悬液,并用刮棒均匀涂开。对称插入2个已灭菌的直径为1 em 的接种环,每个接种环内加入200 uL中药提液,同时做无菌水和75%乙醇的空白对照。在28℃ 恒温下培养,随时观察。

   
2、结果与分析

   
2.1 实验内容设置

    本项实验以无菌水为空白,以提取溶剂75% 乙醇为对照,在进行抑菌实验的同时,加入空白和对照实验,以保证实验的准确可靠。

    2.2 不同中草药抑菌效果比较

    用6种中草药提取液对供试的霉菌和酵母菌进行抑菌筛选对比实验。实验结果表明,所选6种中草药对霉菌和酵母菌均有不同程度的抑制作用,以丁香和肉桂抑菌效果优良。其中丁香对2种供试的霉菌抑制效果最为显著,肉桂次之。肉桂对酵母菌抑制效果最为显著,丁香次之。其它4种中草药虽对霉菌和酵母菌有抑制作用,但效果不明显,见表1。



    2.3 丁香对霉菌抑菌效果

    霉菌的平板对峙培养结果表明,丁香提取液对米曲霉和黑曲霉的抑制效果最显著。该实验持续观察30天,在未加抑菌剂前,菌株长势良好,加入抑菌剂后霉菌孢子受抑萎缩,且在观察期间无生长迹象。而空白和对照的菌株则生长旺盛,孢子长满整个培养皿,见图1。

    2.4 肉桂对酵母菌抑菌效果

    酵母菌的平板对峙培养结果表明,肉桂提取液对酵母菌的抑制效果最为显著。在30天的实验观察期内,肉桂提取液的抑菌圈最大,且抑菌圈未见缩小。空白的酵母菌长满整个培养皿,对照则除接种圈内部外,酵母菌布满培养皿,见图2。





    2.5 中草药抑菌有效期的调查

    丁香对霉菌显示出很强的抑制作用,并且在2个月的观察期内可有效地抑制霉菌生长繁殖,并使孢子受抑萎缩。研究趋势表明,丁香可长期有效地抑制霉菌生长。见表3、图3。





    3、讨论

    试验通过对6种具有抑菌效果中草药的提取液和抑菌效果进行研究比较,丁香提取液抑菌效果显著,而且具有色泽浅淡、香气纯正等特点,特别适合作为食品用天然防腐剂。桂皮提取液对供试酵母菌株表现出优良的抑制效果,但其提取液色泽较深、香气浓厚,宜稀释后使用。丁香对霉菌显示出很强的抑制作用,并且在2个月的观察期内可有效地抑制霉菌生长繁殖,并使孢子受抑萎缩。该项研究针对果蔬贮藏中的易染菌进行生长抑制实验,为开发新型果蔬用天然防腐剂提供了理论依据。将其推广和应用必将带来巨大的经济和社会效益。

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