新鲜果蔬易受病原微生物侵染而腐败变质,果蔬的采后防腐保鲜已成为全世界的重点研究内容。化学防腐剂以其使用简便、效果显著而被广泛应用。但是,随着科学知识的普及,人们对于化学合成物质对人体的危害已有了一定的认识。天然防腐剂的研究与开发利用正是目前市场和消费者的迫切需要。中草药具有药食兼备、作用持久等优势,其中有部分中草药经长期实验和现代微生物手段证明,均能阻止病原微生物的生长,属理想的天然抑菌防腐材料。笔者对丁香、桂皮提取液和抑菌效果进行了研究和比较。为开发天然食品防腐保鲜剂提供理论依据。
1、材料和方法
1.1菌种来源
黑曲霉菌、米曲霉菌、酵母菌均来自山西大学生物工程实验室。
1.2 中草药来源
丁香、肉桂、高良姜、乌梅、知母均购自中药材商店;芥菜籽购自农资市场。
1.3 培养基
1.3.1察氏培养基蔗糖30g;NAN032g;KCI 5 g;K~HP04·3HzD 1g;FeSO4·7H20O.O1g;MgSO4·7HzD0_5g;琼脂15-20g;水1000mL。
1.3.2 麦芽糖培养基蛋白胨10g;麦芽糖20g;酵母膏5 g;琼脂15-18 g;蒸馏水1 000mL。
1.4 菌悬液制备
1.4.1 霉菌菌悬.液 将米曲霉和黑曲霉用划线方法接种于察氏固体培养基上,在27℃下培养一周,使其分离成米粒大小的单个菌落。将单个菌落移种于察氏液体培养基中,在27℃下恒温摇菌7天。离心分离,弃去上清液。加少量无菌水,用超声波打碎,使其形成一定浓度的菌悬液。该试验使用的菌悬液浓度用450 nm 吸光值来标定,黑曲霉为0.157,米曲霉为0.216。
1.4.2 酵母菌菌悬液取酵母菌活化,分离,于麦芽糖液体培养基中,在28℃恒温下摇菌28 h。使其形成一定浓度的菌悬液。
1.5 中草药提取液制备
将洗净晾干的供试中草药样品粉碎,用40目筛过滤。用75% 的乙醇配成固液比为1:4的浸提体系, 于78℃的水浴中提取4h。过滤,取上清液,常温保存。
1.6 抑菌实验(平板对峙培养)
1.6.1 霉菌抑菌实验方法将固体察氏培养基溶化高压灭菌后倒入平皿,待冷却凝固后,对称插入两个已灭菌的直径为1 em的接种环。于培养皿两个接种环中间的部位接入10 uL菌悬液,在28℃恒温培养箱中培养2天。待霉菌长成1 em左右的菌株后,将200 uL中药提取液加入接种环内,同时做无菌水和75% 乙醇的空白对照。28℃恒温下培养,随时观察。
1.6.2 酵母菌抑菌实验方法将固体麦芽糖培养基溶化高压灭菌后倒入平皿,待冷却凝固后,接入50 uL菌悬液,并用刮棒均匀涂开。对称插入2个已灭菌的直径为1 em 的接种环,每个接种环内加入200 uL中药提液,同时做无菌水和75%乙醇的空白对照。在28℃ 恒温下培养,随时观察。
2、结果与分析
2.1 实验内容设置
本项实验以无菌水为空白,以提取溶剂75% 乙醇为对照,在进行抑菌实验的同时,加入空白和对照实验,以保证实验的准确可靠。
2.2 不同中草药抑菌效果比较
用6种中草药提取液对供试的霉菌和酵母菌进行抑菌筛选对比实验。实验结果表明,所选6种中草药对霉菌和酵母菌均有不同程度的抑制作用,以丁香和肉桂抑菌效果优良。其中丁香对2种供试的霉菌抑制效果最为显著,肉桂次之。肉桂对酵母菌抑制效果最为显著,丁香次之。其它4种中草药虽对霉菌和酵母菌有抑制作用,但效果不明显,见表1。