中华人民共和国进出口商品检验行业标准
SN 0199-93
Method for determination of thiamphenicol residues in meat for export
1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口肉中甲砜霉素残留量检验的抽样、制样和气相色谱测定方法。 本标准适用于出口鸡肉中甲砜霉素残留量的检验。
2 抽样和制样
2.1 检验批 以不超过2 500件商品为一检验批。 同一检验批内商品应具有同一特征,如包装、标记、产地、规格、等级等。
2.2 抽样数量
检验批中的件数 最低抽样件数
1～25 1
26～100 5
101～250 10
251～500 15
501～1000 17
1 001～2 500 20
2.3 抽样方法 按2.2规定的柚样件数随机抽取,逐件开启。每件至少取一包,去掉塑料薄膜,从每包抽取肉样不少于50 g,总量不少于2 kg,放入清洁容器内,加封后,标明标记,及时送交实验室。
2.4 样品的制备 将所取原始样品缩分出1 kg,取可食部分,经组织捣碎机捣碎,均分成两份,装入洁净容器内,密封,作为试样,并标明标记。
2.5 试样保存 将试样于-18℃以下冷冻保存。 注:在抽样和制样的操作过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
3 测定方法
3.1 方法提要 将鸡肉样用丙酮提取,加入氯化钠溶液,用乙酸乙酯提取,蒸除乙酸乙酯后,加入乙 腈及正己烷,振摇均匀,分取乙腈层,真空除去乙腈后,用乙酸乙酯、乙酸酐、吡啶进行乙酰化,用硅胶柱净化后用配有火焰光度检测器的气相色谱仪测定,外标法定量。
3.2 试剂和材料
3.2.1 丙酮:分析纯,重蒸馏。
3.2.2 正己烷:分析纯,重蒸馏。
3.2.3 乙酸乙酯:分析纯,重蒸馏。
3.2.4 乙腈:分析纯,重蒸馏。
3.2.5 甲醇:紫外光谱纯。
3.2.6 三氯甲烷:分析纯,重蒸馏。
3.2.7 乙酸酐:优级纯。
3.2.8 吡啶:优级纯。
3.2.9 氯化钠:优级纯。
3.2.10 无水硫酸钠:分析纯,于650℃灼烧4 h,冷却后贮于密闭容器中。
3.2.11 甲砜霉素标准品:纯度≥99%。
3.2.12 甲砜霉素标准溶液:精确称取甲砜霉素标准品10.0mg溶于丙酮,定容至50 mL。取此液5mL用丙酮稀释至50 mL,为标准工作溶液。此液1mL含甲砜霉素20μg。
3.3 仪器和设备
3.3.1 离心管:50 mL。
3.3.2 高速均质器。
3.3.3 旋转蒸发器。
3.3.4 离心机。
3.3.5 硅胶柱:将柱色谱用硅胶(100～200目)3g用三氯甲烷装入10mm×300mm玻璃层析柱中,上面装入无水硫酸钠1g。
3.3.6 气相色谱仪:配FPD检测器,S型滤光片(329nm)。
3.4 测定步骤
3.4.1 提取 称取试样20g(精确到0.1g)于50mL离心管中,加入30mL丙酮,均质1min后,以3000～ 3500r/min离心5min,将上清液倒入另一个50 mL离心管中,残留物中加入20 mL丙酮,同样均质离心后合并上清液。残留物中再加入10 mL丙酮,同样均质离心后,合并上清液。
3.4.2 净化 将离心管内的丙酮提取液再离心5min,将上清液移入分液漏斗,加入3%氯化钠150mL, 混匀,再加入150mL乙酸乙酯振摇混匀,静置分层后将乙酸乙酯层转移到500mL烧瓶中;水层溶液再用100 mL、50mL乙酸乙酯按上述步骤萃取两次,合并乙酸乙酯萃取液,用旋转蒸发器蒸除其中的溶剂,残留物用5mL、3 mL及2 mL乙腈分三次洗入分液漏斗,加入正己烷30mL,振摇,静置,分层后弃去正己烷,用旋转蒸发器蒸干乙腈层。
3.4.3 乙酰化 在残留物中加入乙酸乙酯0.5mL、乙酸酐0.5mL及吡啶2滴,混匀后,放置30min。 在反应液中加入水5mL,混匀。用三氯甲烷提取3次,每次用5mL,收集三氯甲烷提取液。用水洗涤三次,每次用5mL水,弃去水层后,在三氯甲烷中加入无水硫酸钠5g摇匀。静置后将溶液注入硅胶柱。用三氯甲烷30mL洗剩下的硫酸钠,将洗液注入硅胶柱,弃去淋洗 液。用甲醇-三氯甲烷(2+8)50mL洗脱,收集洗脱液,用旋转蒸发器蒸发至干,以丙酮 0.5 mL溶解残留物,供气相色谱测定。
3.4.4 测定
3.4.4.1 色谱条件
a. 色谱柱:玻璃柱,1 m×3mm(内径),填充物为2%(m/m)OV-17涂于Chromosorb WHP(80～100目)；
b. 色谱柱温度:280℃;
C. 进样口温度:300℃;
d. 检测器温度:300℃;
e. 氮气:纯度≥99.99%,60 mL/min;
f. 氢气:75 mL/min;
g. 空气:100 mL/min。
3.4.4.2 色谱测定 根据样液中甲砜霉素含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中甲砜霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定,在上述色谱条件下,甲砜霉素保留时间约为4.5min。
3.4.5 空白试验 除不加试样外,按上述测定步骤进行。
3.4.6 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按下列公式计算:
h·c·V
X=─────-
hs·m
式中:X--试样中甲砜霉素残留量,mg/kg;
h--样液中兽药的峰高,mm;
hs--标准工作溶液中兽药的峰高,mm;
c--标准工作溶液中兽药的浓度,μg/mL;
m--称取的试样量,g;
V--样液最终定容体积,mL。
注:计算结果需扣除空白值。
4 方法的测定低限、回收率
4.1 测定低限:0.5mg/kg。
4.2 回收率 回收率的实验数据:甲砜霉素浓度在0.1～1.0mg/kg范围,回收率为80%～99%。
附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。
本标准由中华人民共和国河北、河南、北京进出口商品检验局负责起草。
本标准主要起草人王凤池、段文仲、杨冀州、胡文炬。
主要参考文献： 厚生省生活卫生局乳肉卫生课编集，《畜水产食品中の残留物质检查法》,25,チアンフェニコ-ル,p202～206。
中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-06-04批准 1993-08-01实施
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