茶 游离氨基酸总量测定

中华人民共和国国家标准
GB 8314-87 Tea-Determination of free amino acids content

本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。
茶叶水浸出物中具有α-氨基的有机酸且呈游离状态存在者,均称茶叶游离氨基酸。
1 原理 氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项:
2.1 分析天平: 感量0.0001g。
2.2 分光光度仪。
3 试剂和溶液
3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液: 按GB 8313-87《茶 茶多酚测定》中3.2的规定,配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和 1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95mL和1/15M磷酸二氢 钾溶液5mL,混匀。
3.2 2％茚三酮溶液: 称取水合茚三酮(纯度不低于99％)2g,加50mL水和80mg氯化亚锡(GB638-78,分析纯),搅拌均匀。分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水 定容至100mL。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液: 称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液。准确吸取5mL母液,加水定容至50mL作为工作液(1mL含茶氨酸或谷氨酸0.1mg)。
4 操作方法
4.1 取样 按GB 8302-87《茶 取样》规定取样。
4.2 试样的制备按GB 8303-87《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。
4.3 测定步骤
4.3.1 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
4.3.2 测定 准确吸取试液(4.3.1)1mL,注入25mL容量瓶中,加0.5mLpH8.0缓冲液(3.1)和0.5mL 2％茚三酮溶液(3.2),在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25mL。放置10min后, 用5mm比色杯,在570nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。
4.3.3 氨基酸定量标准曲线的制作 分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液(3.3)于一组25mL容量瓶中, 各加水4mL、茚三酮溶液(3.2) 0.5mL和缓冲液(3.1)2mL,在沸水浴中加热15min,冷却后 加水定容至25mL,按4.3.2的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨 酸浓度绘制标准曲线。 注: 制作标准曲线时,所用蒸馏水,必须是二次蒸馏水。
5 结果计算
5.1 计算方法和公式 茶叶中游离氨基酸含量,以干态质量百分率表示,按下式计算:
　　　　　　　　　　　　　C　　L1
　　　　　　　　　　　　──×──
　　　　　　　　　　　　1000　 L2
　　游离氨基酸总量(％)＝ ───── ×100
　　　　　　　　　　　　　　 M×m
式中: L1--试液总量,mL;
L2--测定用试样量,mL;
M--试样量,g;
C--根据4.3.2测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg数;
m--试样干物质含量百分率,％。
　　如果符合重复性(5.2)的要求,取两次测定的算术平均值作为结果。
5.2 重复性 同一样品进行两次测定,测定值之差,每100g试样不得超过0.1g。
6 结果报告 试验报告应包括下列内容:
a. 使用的方法;
b. 测定的结果(取小数点后一位);
c. 本标准中末规定的或另加的操作;
d. 试样的名称和产地;
e. 试验日期,操作人员。

附加说明:
　　　本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。
　　　本标准由中国农业科学院茶叶研究所、商品部杭州茶叶加工研究所、上海进出口商品检验局负责起草。
　　　本标准主要起草人阮宇成、钟萝、严家辉、刘维华、周卫龙、王济安。

中华人民共和国商业部1987-11-19批准 1988-07-01实施