孢子数测定法

ZB X 66028-87 Enumeration of spore

本方法适用于酿造酱油半成品-菌种的孢子数测定。

1 仪器与试剂
a. 显微镜、血球计数板、盖片;
b. 95%酒精、稀硫酸 (1∶10);
c. 平天: 感量0.001g 。
2 操作方法
2.1 样品稀释:精确称取种曲或二级菌种1g (称淮至0.002g),倒入盛有玻璃珠的250mL锥形瓶内,加95%酒精5mL,加无菌水20mL,加稀硫酸10mL,充分振摇,使分生孢子个个分散,然后用多层纱布过滤、冲洗,务使滤渣不含孢子,稀释至500mL。
2.2 制片:取稀释液1滴,滴于血球计数板的计算格上,然后将盖片轻轻由一边向另一边压下,使盖片与计数板完全密合,液中无气泡,用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液,静置数分钟,待孢子沉降。
2.3 观察计数:用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子,在血球计数板上处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到,因而计数时必须逐格调动微细螺旋,才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上,应一律取二边计数,而弃另二边,以减少误差。使用16×25的计数板时,只计板上四个角上的4个大格(即100个小格)。如果使用25×16的计数板,除计四个角的4个大格外,还需要计中央一大格的数目(即80个小格)。每个样品重复观察计数不少于2次,然后取其平均值。即为该样品种曲的孢子数。
3 计算
3.1 16×25的计数板
　　　　　　　　　　　　　n 　　　　　　　　V
　　　孢子数（个／克） =━━×400×10000×━━
　　　　　　　　　　　　 100 　　　　　　　G
　　　　　　　　　nV
　　　=4×10**4×━━ ……………………………(1)
　　　　　　　　　G
式中:n--100小格内孢子总数,个;
V--孢子稀释液体积,mL;
G--样品重量,g。
3.2 25×16的计数板
　　　　　　　　　　　　　 n 　　　　　　　　V
　　　 孢子数（个／克） =━━×400×10000×━━━
　　　　　　　　　　　　　 80 　　　　　　　　G
　　　　　　　　　nV
　　　=5×10**4×━━ ……………………………(2)
　　　　　　　　　 G
式中:n--80小格内孢子总数,个;
V--孢子稀释液体积,mL;
G--样品重量,g。
4 注意事项
4.1 称样要尽量防止孢子的飞扬。
4.2 测定时,如果发现有许多孢子结集成团或成堆,说明样品稀释未能符合操作要求。因此必须重新称重、振摇、稀释。
4.3 生产实践中应用时,种曲以干物质计算。因而需要同时测定种曲水分,计算时样品重量则改为绝干重量。
样品绝干重量＝G(1-W)…………………………………(3)
式中:G--样品重,g;
W--样品水分的百分比含量,%。

附加说明:
　　　　本标准由商业部副食品局提出。
　　　　本标准由上海市酿造科学研究所起草。
　　　　本标准主要起草人须凤高。

中华人民共和国商业部1987-11-20批准 1988-07-01实施