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常用染色法

时间:2014/9/29 13:30:00 来源:网友

单染色法

只用一种染料染色。由于大多数细菌胞浆内含有酸性物质,可与碱性染料结合,故常用吕氏美蓝、结晶紫和稀释石碳酸复红等染液。此法可观察细菌的大小、形态与排列,不能显示细菌的结构与染色特性。

2.复染色法

用两种或两种以上不同染料可将细菌染成不同的颜色,除可观察细菌的大小、形态与排列外,还反应出细菌染色特性,具有鉴别细菌种类的价值。常用的有革兰染色法和抗酸染色法。

(1)革兰染色:①细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液染1min,清水冲去染液。②加碘液媒染 1min,水洗,甩干。③用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30s,至无紫色洗落为止,水洗,甩干。④加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30s,水洗。⑤干后显微镜下镜检观察结果,革兰阳性菌染成紫色,革兰阴性菌为红色。

(2)抗酸染色:萋-尼 (Ziehl-Neelse)抗酸染色法:①细菌涂片经火焰固定,加石炭酸复红溶液,徐徐加热至有蒸气出现,切不可沸腾。染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染液蒸干。持续染5min(奴卡菌需要加长时间),水洗,甩干。②滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至无红色脱落为止,水洗,甩干。③加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗。④干后显微镜下镜检观察结果,抗酸杆菌染成红色,非抗酸杆菌为蓝色。

金胺O-罗丹明B染色法:①细菌涂片固定后加第1液30~90s。②弃去第1液后加第2液染15min。③用第3液脱色1~2min,水洗。④滴加第4液染30s,水洗,⑤干后置荧光显微镜下镜检观察结果  在淡蓝色背景下,抗酸杆菌呈红色,其它细菌和细胞呈蓝色。

3.特殊染色法

(1)鞭毛染色(改良Ryu法):①玻片的处理  将新载玻片浸泡在95%乙醇中。临用时取出,以干净纱布擦干。②在玻片上滴蒸馏水1滴。③挑取培养物少许,轻触蒸馏水滴顶部,仅允许极少量细菌进入水滴,不可搅动,以免鞭毛脱落。④置35℃孵箱自然干燥,不能用火焰固定,滴加鞭毛染液染1~2 min轻轻水洗。⑤干后显微镜镜检观察结果  鞭毛和菌体呈紫色。

(2)异染颗粒染色(阿尔培托法):①细菌涂片经火焰固定,加甲液染色3~5min。水洗。②滴加乙液,染1min。水洗。③干后显微镜镜检观察结果  菌体呈绿色,异染颗粒呈蓝黑色,用于白喉棒状杆菌染色。

(3)荚膜染色:①奥尔特荚膜染色法:将已固定的细菌涂片滴加3%沙黄染液,用火焰加温染色,持续3min,冷却后水洗,待干镜检。结果:菌体呈褐色,荚膜呈黄色,此法主要用于碳疽芽胞杆菌。②Hiss氏硫酸铜法:染液:第一液为结晶紫乙醇饱和液5ml加蒸馏水95ml 的混合液;第二液为20%硫酸铜水溶液。方法:细菌涂片自然干燥,乙醇固定。滴加第一液,微加热染1min。再用第二液将涂片上的染液洗去,勿再水洗,倾去硫酸铜液,以吸水纸吸干镜检。结果:菌体及背景呈紫色,荚膜呈鲜蓝色或不着色。

(4)芽胞染色:染液:第一液为萋-纳氏石炭酸复红液,第二液为95%乙醇,第三液为碱性美蓝液。方法:将已固定的细菌涂片滴加第一液,微加热染5min,冷却后水洗。用第二液脱色2min,水洗。加第三液复染1min,水洗,待干镜检。结果:菌体呈蓝色,芽胞呈红色。

4.负染色法

背景着色而菌体本身不着色的染色为负染色法。最常见的是墨汁负染色法,用来观察真菌及细菌荚膜等。在标本涂片处滴加染液,混合后加上盖玻片(勿产生气泡),轻压。在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞,转高倍镜或油镜确认,如新型隐球菌可见宽厚透亮的荚膜,背景为黑色。

5.荧光染色法

经荧光素染色的细菌,或荧光素标记的荧光抗体与相应抗原的细菌、病毒结合形成的复合物,在荧光显微镜下发出荧光。




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