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沙门氏菌及检验

时间:2013/1/9 16:59:00 来源:网友

 人沙门氏菌病有四类综合症:沙门氏菌病;伤寒;非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致,通常表现为轻度,持久性腹泻。伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。未接受过治疗的病人致死率可超过10%,而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%,幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。

  非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致,能影响所有器官,有时还引起死亡。幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。

一、致病性

  沙门氏菌胃肠炎,潜伏期一般6-72小时,主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。病程一般1-2天或更长。感染剂量为15-20个菌,死亡率达1-4%。最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。污染源主要是人和家畜的粪便,沙门氏菌常存在于动物中,特别是禽类和猪。在许多环境中也有存在。从水,土壤,昆虫中,从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细菌。它们可以存在于多类食品中,包括生肉,禽,奶制品和蛋,鱼,虾和田鸡腿,酵母,椰子,酱油和沙拉调料,蛋糕粉,奶油夹心甜点,顶端配料,干明胶,花生露,橙汁,可可和巧克力。

  沙门氏菌属也是嗜温性细菌,在中等温度,中性pH,低盐和高水活度条件下生长最佳。生长最低水活度为0.94。兼性厌氧,对中等加热敏感。同样,该菌属能适应酸性环境。通过卫生以防止二次污染;蒸煮;巴氏消毒等控制。正常家庭烹调,个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染,以及控制时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。

二、检验

  因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体,因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。从食品中分离和鉴定沙门氏菌,当前通用的方法学分5个步骤:

  1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。

  2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间,样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖,同时阻止大多数其他细菌的增殖。

  3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。

  4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。

  5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。

  这五个步骤代表理想状况。不过一个有经验的检验员,可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。

  目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础,25g食品为标准分析单位。

三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备

  下面的方法是以25g样品为检测单位,样品:肉汤为1∶9的比例。除非另有说明,根据混合程度,加足够的肉汤保持1∶9的比例。对不需准确称量检测的样品,例如:田鸡腿,可参看特定方法说明。

1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶(去脂牛奶,含2%脂肪牛奶,全脂奶,和脱脂奶)、粉状调制食品(蛋糕,甜饼,炸面圈,饼干和面包)、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品:

  检验前的冷冻样品最好不要解冻。如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分,则尽可能迅速的解冻所需部分,使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。解冻需在45℃以下,有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2�5℃,18小时内解冻。无菌操作称取25g样品,放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。非粉状的样品,加入225mL灭菌乳糖肉汤。如果制品是粉状,加入约15mL灭菌乳糖肉汤,用灭菌玻璃棒,匙或灭菌压舌器搅拌,使成均匀悬液。再加3份乳糖肉汤10mL,10mL,190mL,使总量为225mL。充分搅拌,直到样品完全悬浮没有团块为止。盖紧瓶盖在室温静置60min。振摇使充分混匀,用试纸测定pH值。必要时用灭菌的1NNaOH或1NHcl调节pH至6.8±0.2。在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。然后将瓶盖旋松约1/4圈,置35℃培养24±2小时。以下步骤按四,1-10进行。

2、蛋类:

  A、含壳蛋:用硬刷子在水流下刷洗蛋。把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸钠(SDS)的200ppm氯离子溶液中浸泡30min。加8mL 5.25%次氯酸钠到含1g SDS的992mL蒸馏水中,制备200ppm cl-/0.1%SDS溶液。这种消毒剂需在使用前临时制备。无菌操作打开蛋,使用灭菌的蛋分离器,弃去蛋白。无菌操作称取25g蛋黄到灭菌的500mL锥型瓶或其他合适容器内。加225mL胰胳胨(胰化物)大豆肉汤(TSB),并振荡充分混匀。在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

  B、液全蛋(均状):无菌操作称25g置于无菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中。加225mLTSB并振荡充分混匀。按上面所述继续。

  C、煮硬的蛋(鸡蛋,鸭蛋或其他蛋类):目前,不知道蛋白中的沙门氏菌抑制因子是否具有热稳定性。因此,无菌操作分离蛋白和蛋黄。称取25g粉状蛋黄固体到无菌500mL锥型瓶或其他合适容器中。加225mLTSB并旋转充分混匀。按上面所述继续。

3、脱脂乳粉

  A、速溶:无菌操作称取25g样品,加入灭菌烧杯(250mL)或其它合适容器内。经灭菌玻璃或纸质(用带卷好以备高压灭菌)漏斗,往灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中(装有225mL煌绿水),缓缓倾注25g检测单位,使其覆盖在煌绿水表面。也可将多份25g检验单位按比例 倒入相应份数的煌绿水表面。按每1000mL灭菌蒸馏水中加1%煌绿溶液2mL配置煌绿水。将盛有样品�前增菌培养基的容器静置60±5分钟。松松地盖上容器盖,不需要混合或调节pH值,于35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

  B、非速溶:按上述A脱脂乳粉的方法进行,只不过不允许将多份检验单位按比例合并检验。

4、全脂奶粉:

  无菌操作称取25g样品,加入无菌的,带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。加入225mL灭菌蒸馏水并振荡充分混匀。盖紧在室温下静置60分钟。使其充分混匀,用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。然后加0.45mL1%的煌绿染液并充分混匀。旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

5、酪蛋白:

  无菌操作称取25g样品,加入无菌均质杯中,加225mL灭菌乳糖肉汤到样品中并匀质2分钟。无菌操作,把已匀质的混合物转移到灭菌,带螺旋帽的500mL广口瓶或其他合适的容器内。盖紧盖子在室温下静置60分钟。振摇使充分混匀,用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。旋松瓶盖约1/4圈后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

6、大豆粉:

  无菌操作称取25g样品,加入灭菌烧杯(250mL)或其它合适容器内。用灭菌玻璃或纸质(用带卷好以备高压灭菌)漏斗,往装有225mL乳糖肉汤的灭菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中,缓缓倾注25g检测单位,使其覆盖在乳糖肉汤表面。检测单位(25g)不可多份按比例混合检测。容器静置60±5分钟。松松地盖上容器盖,不需要混合或调节pH值,于35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

7、含蛋制品(面条,蛋卷,通心粉,意大利面条)、干酪、生面团、调制色拉(火腿,蛋,鸡肉,金枪鱼,火鸡)、新鲜的、冷冻的、或干的水果和蔬菜、果仁、甲壳类动物(小虾,蟹,小龙虾,LANGOSTINOS,龙虾)和鱼:

  检测前冷冻样品最好不要解冻,如果冷冻样品必须软化以取其检测部分,则要在持续搅拌并带有自动调温器控制的45℃水浴内15分钟内解冻。或者在2�5℃18小时内进行。

  无菌操作称取25g样品,加入灭菌的均质器中。加入225mL灭菌的乳糖肉汤并均质2分钟。再无菌操作转移已均质的混合物到无菌的带螺旋帽的广口瓶中(500mL)或其他合适的容器内。盖紧瓶盖,于在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。充分混匀。旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时,以下步骤按四,1-10继续。

8、干酵母:

  无菌操作称取25g样品,放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500mL),或其他合适的容器内。加入225mL灭菌胰酪胨(胰化)大豆肉汤,充分混匀使酵母形成均匀悬液。盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。必要时,调节pH值至6.8±0.2,在测定最终pH前要混合充分。旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时。非活性干酵母,以下步骤按D,1-11进行。活性干酵母,混匀经培养过的样品,转种1mL到10mL月桂基蛋白(LST)中,另转种1mL到10mL四磺酸盐(TT)肉汤中。将此两种选择性肉汤于35℃培养24±2小时。充分地旋转混合经培养过的增菌肉汤,每种肉汤都要用3mm接种环划线接种3个选择性平板(四,3和四,4),接下面的四,5�10进行。

9、食品上霜和上顶用的混合物:

  无菌操作称取25g样品,放入灭菌,带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。加入225mL营养肉汤并充分混合。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀,用试纸测定pH值。必要时,调节pH值至6.8±0.2。旋松瓶盖约1/4转后,置35℃培养24±2小时。以下步骤按四,1-10继续。

10、调味品:

  A、黑胡椒、白胡椒、芹菜籽或者干辣椒粉、小茴香、红辣椒、欧芹片、迷迷香、芝麻、麝香草、蔬菜片:无菌操作称取25g样品,放入灭菌带螺旋帽的广口瓶或其他合适的容器中。加入225mL灭菌胰酪胨大豆(TSB)肉汤,充分混匀,盖紧瓶盖于在室温下静置60分钟。旋动混匀,用试纸测定pH值。必要时,调节pH值至6.8±0.2。


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