1 简介
本产品是用竞争酶联免疫反应原理来检测生物样本中的氯霉素含量。本试剂盒包含检测所需的所有试剂——包括标准品。
检测数量：96孔（包括标准品）
检测时间：20分钟
2 应用范围
本试剂盒可用于检测奶、组织（肌肉、肝脏、肾脏、虾类、蟹类、鱼类）、尿液、血液和饲料样本中的氯霉素。
3 原理
反应在包被了氯霉素抗体的固相微孔板上进行。标准品、样品和酶标物加入到微孔中，第一次温浴时，标准品或样品中的游离氯霉素分子与酶标记的氯霉素分子竞争结合吸附在固相上的抗体结合位点。没有结合的分子被清洗除去，通过加入显色底物来确定已经结合的酶的活性，酶使得无色的底物转变成兰色，加入反应终止液使得兰色变为黄色，用酶标仪在450nm处读出吸光度。颜色的深浅可以转换为样品中氯霉素的不同浓度。
4 试剂组成
微孔板：96孔（12×8，可分拆）直接包被氯霉素抗体
标准品：0.025ng/mL; 0.1ng/mL; 0.25ng/mL; 1ng/mL; 4ng/mL; 1ml含0.1ug/ml浓度的氯霉素标准品1瓶
酶标物冻干粉：玻璃瓶 1瓶
酶标物稀释液：13ml塑料瓶1瓶（棕色）
显色剂：13ml 塑料瓶1瓶（棕色）
终止液：13ml塑料瓶1瓶（白色）
清洗液10×：50ml塑料瓶1瓶（白色）
氯霉素样品稀释液10×：50ml塑料瓶1瓶（白色）
5 需要但未提供的材料
样品前处理需要：
－ 甲醇、乙酸乙酯、正己烷、异辛烷、三氯甲烷
－ 组织匀浆机、天平、水浴锅，摇床（振荡器）
－ 离心机，氮吹仪，混合振荡器
检测中需要：
－ 20～200ul移液枪和枪头
－ 50～200ul多通道移液枪和枪头
－ 配备450nm滤光片的酶标仪
－ 挤瓶
6 注意事项
－ 终止液含有硫酸，注意不要接触皮肤
－ 显色剂有毒，不要接触皮肤；如果接触请用水冲洗
－ 不要在有效期过后使用试剂
－ 不同批号的试剂不要混用
7 保存
－ 2～8℃保存，切勿冰冻
－ 没有使用的微孔条请务必用干燥剂保存在密封的袋子中
8 样品前处理
8.1尿样
8.1.1直接法
— 200μl尿样与800μl氯霉素样品稀释液混合
— 混合物在2000g，离心10min
— 取50μl上清用于检测
— 检测最终结果应乘以稀释倍数5
8.1.2抽提法
建议对“深色/不洁”尿样采用
— 1ml尿液用1M乙酸调PH值到4.8
— 加入25μl蜗牛液（Helix pomatia juice），37℃下温浴过夜或55℃下温浴2小时。
— 冷却至室温，并将PH值调节到7±0.5
— 加入2ml乙酸乙酯，混合1min。静置5-10 min分层。
— 将1ml上层液（乙酸乙酯层）转移到干净的试管中。
— 50℃，氮吹仪吹干
— 用200氯霉素样品稀释液溶解，混匀
— 取50μl用于检测
— 检测最终结果应乘以稀释倍数0.4
8.2 血清/血浆样品
— 1ml血清/血浆加入2ml乙酸乙酯混合1min，静置5-10min，令其发生相分离
— 取1ml乙酸乙酯于一新的试管
— 50℃，氮吹仪吹干
— 加入500μl氯霉素样品稀释液混合均匀
— 取50μl用于检测
— 检测最终结果应乘以稀释倍数1
8.3 奶
8.3.1
— 2000g，离心15min，去除上层脂肪
— 取50ul用于检测。
注意：检测酸奶时，应调样品PH值至中性。
8.3.2
— 取5ml牛奶样品于一试管中
— 2000g，离心15min，去除上层脂肪
— 取2.5ml脱脂奶于一新的试管
— 加入5ml乙酸乙酯，涡旋混合1min，静置10min
— 取4ml乙酸乙酯上层到干净玻璃管中
— 50℃，氮吹仪吹干
— 用200μl氯霉素样品稀释液溶解
— 取50μl用于检测
— 计算最终结果应乘以稀释倍数0.1
（脱脂奶粉处理方法：将60ml蒸馏水加入10g脱脂奶粉，再按上述步骤操作）
8.4蛋类样品
— 取1g匀浆全蛋
— 加入6ml乙酸乙酯涡旋混合1min
— 2000g离心10min
— 取3ml上层乙酸乙酯于一新的试管
— 50℃，氮吹仪吹干
— 加入1ml异辛烷/三氯甲烷（2：3，V/V），再加入500μl氯霉素样品稀释液，涡旋混合1min
— 2000g，离心10min
— 取50μl上层用于检测
— 计算最终结果应乘以稀释倍数1
注意：若上层乳化，可将试管置于80℃水浴约5min，并再次进行离心。
8.5 组织样品（肉类、肝脏、虾类、蟹类、鱼类）
方法一：
— 取3g匀浆样品
— 加入6ml乙酸乙酯涡旋混合，振摇10min
— 2000g，离心10min
— 取4ml乙酸乙酯上层于一新的试管
— 50℃，氮吹仪吹干
— 加入1ml异辛烷/三氯甲烷（2：3，V/V），再加入1ml氯霉素样品稀释液，涡旋混合1min
— 2000g，离心10min
— 吸取50μl上层用于检测。
— 计算最终结果应乘以稀释倍数0.5
注意：若上层乳化，可将试管置于水浴（80℃ ）约5min，并再次进行离心。
另：可以用正己烷代替异辛烷/三氯甲烷。若采用正己烷，离心后应完全去除上层正己烷，移取50μl下层用于检测。
方法二：用于虾、鱼、蟹类的大样品量处理
— 10g匀浆化样品与20ml乙酸乙酯混合10min
— 2000g，离心10min（或用滤纸过滤）
— 取10ml乙酸乙酯层于一新的试管
— 50℃，氮吹仪吹干
— 加入2ml异辛烷/三氯甲烷（2：3，V/V）（或2ml正己烷，参见方法一），并加入1ml氯霉素样品稀释液，充分混合。若发现乳化，可将试管在水浴（80℃）中加热（5min）。并将此溶液在2000g下离心10min。
— 利用巴斯德滴管转移上层清夜（若用正己烷，清夜则在下层）于清洁玻璃管中。
— 再加入1ml异辛烷/三氯甲烷（2：3，V/V）（或1ml正己烷）。混合上述溶液并离心分离如上。
— 吸取50μl上层用于检测（若用正己烷，清液则在下层）。
注：检测最终结果乘以稀释倍数0.2
8.6 蜂产品
8.6.1蜂蜜样品
— 3g样品与3ml蒸馏水充分混合
— 加入6ml乙酸乙酯充分振荡混合10min
— 2000g离心10min
— 转移4ml上层乙酸乙酯于一新的试管
— 50℃，氮吹仪吹干
