我国水产养殖业随着集约化的发展，水产动物免疫力下降，疾病日益突出；同时药物的泛滥使用，也使整个水体的生态平衡得以破坏。中草药系纯天然、无污染且具有增强免疫力的功效，将其应用在水产养殖上具有很好的前景。本文对中草药在鱼类非特异性免疫机能方面的研究概况进行综述。
中草药用于强健机体、增强免疫功能在我国有着古老的历史和悠久的发展历程。近几年来人们将现代科学技术与传统精髓进行结合，研究中草药作为饲料添加剂并应用于畜禽生产，获得了一定的生态效益和社会效益。目前我国的水产养殖随着集约化的发展，水产动物疾病日益突出，养殖水环境的恶化也造成鱼类免疫力的下降，同时药物的泛滥使用，也使整个水体的生态平衡得以破坏。在提倡绿色、健康和可持续发展的观点下，开发和生产代替抗生素类的天然无公害免疫增强剂成为水产工作者的关注重点，对中草药免疫的研究也应运而生并取得了长足进展，这对维护人类健康的绿色食品同样具有重要意义。
1、鱼类非特异性免疫系统
免疫包括非特异性免疫和特异性免疫。两者相互渗透，相互协同而形成不可分割的统一整体。其中，非特异性免疫是特异性免疫发生的基础，即特异性免疫是非特异性免疫的延伸和强化，水产动物主要依靠其非特异性免疫系统来保护自身。
先天免疫能对机体侵袭迅速作出应答，其包括一个庞大且复杂的分子和细胞网络，能杀死病原菌或使其失活。近年来，类似的先天应答在动物和植物上已有研究。与先天应答相关的细胞绝大多数是白细胞类，比如单核巨噬细胞，包括B细胞，中性分叶核粒细胞以及天然杀伤细胞。其他可以产生免疫调节分子的细胞有树突状细胞和纤维原细胞；与先天应答相关的分子有抗菌肽、溶菌酶、转铁蛋白、补体、急性期蛋白、前列腺素、活性氧中间体、环氧化酶2、细胞因子、趋化因子、凝集素以及类铎受体。
2、中草药种类及其活性成分
据《中药大辞典》记载，我国中草药的品种已达5，767种，居世界之首，其中近200种中草药具有免疫活性，均能增强机体的免疫功能，提高机体免疫力。“免疫”首见于明朝《免疫类方》，即免除疫疠。免疫系统是动物机体的防御系统，可特异性或非特异性地排除侵袭机体的异物。具有免疫促进作用的中草药不仅作用于免疫系统，而且通过对整体各功能系统的调节作用来恢复机体的健康。
中草药的活性成分主要有：多糖、甙类、生物碱及挥发性成分。多糖类成份是增强机体免疫功能的物质基础。目前，已找到多糖结构与其免疫活性在功效上的关系，一般具有不同类型不同组分的甙键接连的多聚糖。多聚糖键上的β甙键多为活性所必需，支键存在对活性有益；在甙类化合物中，人参皂甙、黄氏甙、白芍总甙、淫羊霍甙、雷公腾甙、大豆皂甙、西洋参茎叶总皂甙等对免疫都有影响；甘豆草中分离到的总生物碱及大蒜中提取的大蒜素，都能增强巨噬细胞的吞噬功能，激活单核巨噬细胞分泌炎性细胞因子，从而增强机体的免疫功能。机体的免疫应答是一个复杂的多因子系统，各细胞因子间形成网络，相互作用而发挥多环节多途径的整体调节作用。但是，中草药免疫增强剂进入鱼体后的作用机制还需进一步的研究和探讨。
3、中草药作为免疫增强剂的作用机理
从最初研究单味中草药开始，到研究复方制剂对免疫功能的影响，以及研究单味中草药有效活性成分对免疫功能的调节作用，中草药调节机体免疫功能的研究不断深入。中草药免疫增强剂兼具活性刺激、营养、调节及抗菌的多重作用， 使它可以作用于机体的各个系统， 包括神经、心血管、消化、内分泌等， 从而达到使机体恢复正常平衡的效果。中草药作为免疫增强剂的作用机理总结为以下几个方面。
3.1 吞噬能力
从目前的研究来看，对外来介质的吞噬作用是一种先天性生理行为，所有的多细胞物种均具有此功能。吞噬作用在清除异己物质的先天免疫方面尤为重要，而且在获得性免疫方面也具有重要作用，它能吞噬抗原并将病原体运至免疫系统的其他细胞。分析对外来侵袭的先天应答包括用硝基四氮唑蓝、还原试验检测活性氧分子以及对噬菌作用的定量。例如，细菌或真菌引发鲈鱼头肾黏附细胞噬菌活性的研究可运用光学显微镜，同时检测ROS的生成。在这些研究工作中，巨噬细胞与病原菌的比例以及ROS的丰度是随着病原菌的类型而改变的。吞噬作用其他的标记物还有诱导型一氧化氮合成酶的活性。虽然对于这种分子目前还没有可以利用的抗体，但是噬菌活性可被追溯为细菌或病原菌诱发的iNOS基因的敏感性，此最早报道于虹鳟。
顾雪飞等用添加刺五加、蒲公英、枸杞子、金银花和大蒜等单方中草药的配合饲料饲喂鲤鱼，结果表明，在第15d和第30d，所有试验组巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬能力与对照组相比均有显著差异，但免疫器官指数差异不显著。由此得出，金银花和大蒜对鱼类的非特异性免疫机能要优于刺五加、蒲公英、枸杞子，且此影响不一定表现为免疫器官指数的增加。口服酵母细胞壁28d能明显提高中华鳖白细胞吞噬活性和溶菌酶活性，且以1kg鳖重添加1g左右的酵母细胞壁为宜。将黄芪、党参、当归和枸杞等中药材按粉剂和汤剂两种添加形式饲喂真鲷，结果显示，在添加40d和60d后，试验组NBT阳性细胞和血清中溶菌酶活力均显著增加，且以2%添加剂量效果为最佳。
3.2 抗病原菌活性
硬骨鱼类的抗菌活性表现为编码I型干扰素肽段和Mx蛋白的活性，快速杀菌活性则表现为编码抗菌肽家族的基因以及一些抗体的活性。许多文献表明已克隆出不同物种IFN和Mx，最近有报道显示抗鲑鱼Mx肽段的多克隆抗体已运用在免疫组化试验中，以表明其在受病毒感染的鱼体内的免疫活性。大黄鱼色谱纯抗菌肽获得，通过该抗菌肽纯化过程表现出的性质，可初步判断属于分子量小于5kDa的小分子肽类，对热具有一定的耐受性，具有比较强的疏水性。
通过对101种中草药的抑菌活性的测定，发现有68种中草药对至少一种病原菌有抑制作用，其中有强抑制活性的有48种，以五倍子、诃子和大蒜的抑菌谱较广，对所有供试菌株的抑菌活性最强。五倍子的抑菌环直径最大可达32.84mm，MIC值0.0488mg/mL；诃子的抑菌环直径最大为28.72mm，MIC值为1.18725mg/mL；大蒜的抑菌环最大达28.80mm，MIC值0.78125mg/mL。桉叶油亚微乳剂对海豚球菌抑菌作用最为明显，对鳗弧菌、维氏气单胞菌以及嗜水气单胞菌无明显杀菌作用。
3.3 补体
鱼类血清的补体包括C3、C4、C5、C7和C8。除了这些基因的序列已知外，为便于体外研究其活性，相应的抗体也已出现。但是，体外添加抗体研究补体介导的活性还未曾测定。补体C3的多克隆抗体已应用在免疫组化试验中来研究化学需氧量过程中细胞的免疫活性。单方中草药的配合饲料饲喂鲤鱼，结果表明在第30d金银花组和大蒜组血清中补体C3的活性与对照组相比有显著差异。用不用剂量的中草药制剂饲喂黄颡鱼能显著增加血清中的补体活性。以杜仲、当归、山楂、白术和肉桂为主要原料的复方中草药投喂黄鳝，结果表明试验组补体C3活力显著高于对照组。怀山药和怀菊花以2%比例投喂黄河鲤鱼，发现怀菊花能显著增加鲤鱼血清中补体C3的含量，但两种中草药对补体C4含量的影响均不明显。
3.4 细胞因子
近几年，编码硬骨鱼类细胞因子的基因数量急剧增加，但是这些庞大的数据并未促进其生物活性的研究，而且目前只有两种细胞因子的抗体可以利用，即IL-1、IL-1β和肿瘤坏死因子。肿瘤坏死因子是一种调节炎症反应的重要的中间介质，虹鳟中被确定有两种TNF基因。利用蛋白质印迹技术，发现rTNF存在多种结构形式，包括单体、二聚体和三聚体，表明同源三聚体结构的形成对TNF的生物活性是非常必要的。
中草药添加剂对山女鳟脾及血细胞中IL-1β含量起到略微的促进作用，但抑制血浆中IL-1β的含量。复方中草药添加量1.5%~2.0%投喂吉富罗非鱼，其脾脏、胸腺、肝脏、鳃和头肾组织中IL-1β和TNF-α基因在实验第7d出现峰值，而低剂量组则在第28d才出现峰值。黄芪多糖和香菇多糖作用头肾巨噬细胞24h后能显著增强IL-1β的体外诱导表达，表明两种多糖对离体培养鲤免疫细胞有明显活性作用，对鲤非特异性免疫具有促进作用。
4、存在的问题
中草药作为饲料添加剂的应用主要存在以下两个方面的问题：我国的天然中草药品种多样，但常用的不到1/10，因此，资源有限，不利于中草药饲料添加剂的大规模和集约化生产；剂型单一，科技含量不高，中草药饲料添加剂大部分为粗制品，有效成分含量偏低，导致用量偏大等问题。中草药有效成分难以控制，对其原理的研究很复杂，既有广度也有深度，也需要现代仪器和检测技术的配合发展。研究中药免疫作用已深入到分子水平。今后，还应在中草药有效成分纯化、中药复方中有效成分的免疫作用等方面进行深入探索。另外，检测免疫作用也应以揭示中药对机体免疫分子调节机制为主要理论依据。
5、结语
作为添加剂的中药种类和配方功能综合庞杂，今后应在研究其主要免疫活性成分的基础上，吸取中西药二者之长，研制出微量化、系列化、和标准化并具有不同生理功能的中药或中西药结合制剂，逐步形成中草药添加剂系列，可以预见研究开发适合水产动物的中草药免疫增强剂将具有广阔的研究和应用前景。
