主题内容与适用范围
本标准规定了市售银耳的卫生要求。
本标准适用于人工合成料栽培银耳、人工段木栽培银耳和野生银耳。银耳制品和鲜银耳亦可参照此标准。
2 引用标准
GB5009.11 食品中总砷的测定方法
GB5009.12 食品中铅的测定方法
GB5009.17 食品中总汞的测定方法
3 感官指标
感官指标见表 1。
项目 指标
外形 色泽 气味
干成品 朵形完整。合成料栽培 叶片白色或浅黄色, 应具有银耳正常
银耳直径≥3cm;段木 表面有光泽,耳基 芳香气味,无异
栽培银耳直径≥lcm 部呈米黄色或橙色, 味、异嗅
无霉点,霉斑
干成品浸泡 (40℃,30min) 朵形
完整,直径明显增大,
叶片应完全展开或基本
展开,边缘整齐,有弹
性,无发粘,软塌现象
4 理化指标
理化指标见表2
项目 指标,mg/kg
米酵菌酸 0.25
铅(以 Pb计) 2.0
砷(以 As计) 1.5
汞(以 Hg计) 0.6
5 检验方法
5.1 米酵酸菌[bongkrekic acid(BA),即酵米面黄杆菌毒索 A(flavotoxin A)〕是由椰毒假单胞菌(pseudomanas cocovenenans)产生的一种可以引起食物中毒的毒素。系统命名为:3-羧甲基-17-甲氧基-6,18,21-三甲基-甘二碳-2,4,8,12,14,18,20-七烯二酸、结构式为:
5.1.1 薄层色谱测定法
5.1.1.1 原理
样品中的米酵菌酸经提取、净化及浓缩后,根据其在短波紫外光 GF254硅胶薄层色谱上显示黑色点的最低检出量测定含量。
5.1.1.2 仪器
a.层析槽(内径长×宽×高,cm:25×6×4)
b. GF254娃胶薄层(50mm×200mm×0.3mm),自制,经110一115℃活化2—3h,置干燥器中可保存一周;
c. 紫外线灯(波长254nm);
d.紫外分光光度计。
5. 1.1.3 试剂
本标准所用的试剂除特殊规定外,均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水,溶液为水溶液。
a. 硅胶 GF254层析用;
b. 薄层色谱展开剂:石佃醚-无水乙醚-冰乙酸[60十40十l.5( v十 v)〕;
c.米酵菌酸标准溶液:称取米酵菌酸标准品,用甲醇配制成每毫升含有米酵茵酸20μg作测定用,置于4℃冰箱中避光保存;
d.甲醛;
e.冰乙酸;
f.石油醚,沸程30—60℃;
g.无水乙醚;
h.三氯甲烷;
i.85g/100mL磷酸;
j.4%( V/V)碳酸氢钠水溶液;
k.6mol/L盐酸。
5.1.1.4 操作方法
5.1.1.4.1 米酵菌酸的提取
干银耳样品经粉碎过40目筛后,称取20g,置具塞锥形瓶中,加入甲醇20mL,于室温中避光浸泡 lh,然后再加入三氯甲烷80mL和85g/100mL磷酸0.2mL,鲜银耳样品经剪碎、磨细及混匀后称取10g,加入甲醇16mL于室温中避光浸泡 lh,然后再加入三氯甲烷64mL和85g/100mL的磷酸0.16mL;振荡30min,过滤,干银耳取滤液50mL,鲜银耳取滤液40mL。
将以上滤液移入分液漏斗中,加入与滤液体积相同的4%(V/V)碳酸氢钠水溶液,振摇2min,静置分层,用带自动控制球吸管吸出上层于另一分液漏斗中,再用4%(V/V)碳酸氢钠水溶液重复提取两次,每次10mL,轻摇,静置,将三次碳酸氢钠水层合并,加入三氯甲烷25mL,振摇2min,静置分层后弃去三氯甲烷层,于分液漏斗中慢慢滴入6mol/L盐酸以调该溶液 PH至2—3,加入石油醚(沸程30—60℃)50mL(鲜银耳样品加40mL),振摇3min,静置分层,取出石油醚层于梨形瓶中,再重复用石油醚30mL和20mL各提取一次(鲜银耳样品两次均为20mL),将石油醚层并人同一瓶中,于40℃水浴中减压吹气浓缩至干,用甲醛移至带 lmL刻度的浓缩管中,于40℃用减压法浓缩至0.2mL以下,并用少许甲醇洗管壁,继续浓缩至干,加甲醛0.125mL,将干物质溶解,混匀,作为样液以供薄层色谱测定用。
5.1.1.4.2 薄层色谱测定
以薄层板的短边为底边,距底边3cm的基线上用微量注射器滴加20ug/mL标准液8μL与10μL两个点,以及样液两个点,每点10μL(鲜银耳样品滴加20μL),在样液的一个点上再滴加20μg/mL标准液10μL。用展开剂展开16cm,取出挥干。在254nm紫外灯光下观察结果如下:(1)标准点应出现黑色点;(2)如样液点在标准点相应位置上未出现黑色点,则样品中米酵菌酸的含量在测定方法灵敏度0.25ppm以下;如在相应位置上有黑色点,而另一点中样液与标准液点重叠,则为阳性,根据样液黑点的强度估计减少滴加微升数,或经稀释后再滴人不同微升数,直至样液与标准色点的强度与面积一致为止。米酵菌酸的比移值为0.22。
5.1.1.4.3 计算
V1 1
X1=0.2 ╳------╳D╳---- … … … … … … …(1)
V2 m1
式中:X1—米酵菌酸含量,μg/g;
0.2——米酵菌酸的最低检出量,μg;
V1—加入甲醇溶解的体积,mL;
V2—出现最低检出量时滴加样液的体积,mL;
D——样液的总稀释倍数;
m1—甲醇溶解时相当样品的质量,g。
5.1.1.4.4 确证试验
对含量高的样品可以进一步作确证试验;将剩余的阳性样液与空白甲醇液分别经薄层分离后,刮下并收集与米酵菌酸标准相应的色谱带与空白处硅胶。各加甲醇4mL,于室温中浸泡l一2h,混匀,离心,吸出上清液,以空白硅胶甲醇洗脱液作对照,用紫外分光光度计测定,应在267nm和236nm处有米酵菌酸的两个最高吸收峰。
5.1.2 高压液相色谱测定法