前 言
本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。
本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、中国农业科学院生物技术所、农业部科技发展中心、中国农业大学。
本标准主要起草人：彭于发、王锡锋、李宁、张大兵、罗云波、黄昆仑、汪其怀、贾士荣。
本标准为首次发布。
转基因植物及其产品检测 通用要求
1范围
本标准规定了转基因植物及其产品检测的通用要求及转基因植物PCR检测实验室的操作规范。
本标准适用于转基因植物及其产品中转基因成分的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适合于本标准。
GB/T15481-2000 检测和检验实验室能力的通用要求
GB/T6682 分析实验用水规格和试验方法
NY/T673 转基因植物及其产品检测 抽样
NY/T674 转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化
NY/T675 转基因植物及其产品检测 大豆PCR方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1 一般术语 General terms
3.1.1 转基因生物 genetically modified organism (GMO)
通过基因工程技术改变基因组构成的生物。包括转基因植物、动物和微生物。
3.1.2 转基因植物 genetically modified plant organism (GMP), transgenic plant
通过基因工程技术改变基因组构成的植物，是转基因生物的一类。
3.1.3 定性检测极限 detection limit
以转基因生物（如种子）提取的DNA或标准双链DNA分子作为PCR反应的模板，所能检测到的脱氧核糖核酸（DNA）的极限（需要确保阳性样品的纯度，才能达到本标准检测方法的灵敏度）。
3.2 与DNA提取和纯化相关的术语 Terms relative to extraction and purification of DNA
3.2.1 DNA提取 DNA extraction
将DNA从一个样品的多种组分中分离出来。
3.2.2 DNA纯化 DNA purification
获得不含PCR反应抑制因子的DNA。
3.3 与DNA扩增和PCR技术相关的术语 Terms relative to DNA amplification and to the PCR
technique
3.3.1 DNA扩增 DNA amplification
体外放大DNA分子拷贝数的生物学方法，如PCR。
3.3.2 扩增子 amplicon
由PCR等DNA扩增方法产生的DNA片段。
3.3.3 聚合酶链式反应（PCR）polymerase chain reaction，
模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜温度下，两条引物分别与模板DNA两条链上的一段互补序列发生退火，并在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP
（deoxyribonucleoside
triphosphate，脱氧核苷三磷酸）为底物，使退火引物延伸从而合成DNA，如此变性、退火和合成DNA反复循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。
3.3.4 引物 primer
一定长度和顺序的寡核苷酸链。
3.3.5 筛查检测法 detection by screening
用多种转基因植物共有的标记基因、表达调控序列等通用元件对被检产品中是否含有转基因成分进行PCR检测的方法。
3.3.6 身份检测法 detection by identification
与标准品比较确定GMO身份的检测方法。
3.3.7 靶序列(目的DNA) target sequence (target DNA)
PCR反应中检测特异性扩增的DNA序列。
3.3.8 旁邻片段 (边界序列) border fragment (border region, border sequence)
插入在染色体上的外源基因序列和宿主生物基因组片段连接的DNA片段。
3.3.9 终点法分析 endpoint analysis
一种定性、定量的分析方法，如ELISA-PCR，可对PCR反应的扩增子进行定性和定量分析。
3.3.10 实时分析 real-time analysis
一种贯串PCR反应过程，对PCR扩增效率、扩增情况及数据进行监控的定量PCR分析方法，如荧光探针的杂交过程的监控。
3.3.11 连接片段 junction fragment
两个不同功能基因序列之间的连接序列或片段。
3.4 与对照相关的术语 Terms relative to controls
3.4.1 GMO阳性对照 GMO positive control
用于PCR扩增的标准目的DNA或转基因植物源材料的DNA分子。
3.4.2 GMO阴性对照 GMO negative control
用于PCR扩增的标准非转基因植物材料的DNA分子。
3.4.3 PCR内部对照 PCR internal control
加入一种无关的DNA序列到纯化DNA的样品中，然后再进行PCR扩增，以检测是否存在PCR反应的抑制物质。
3.4.4 阳性PCR对照 positive PCR control
用含有目的序列的样品DNA进行PCR扩增。
3.4.5 阴性PCR对照 negative PCR control
用不含有目的序列的样品DNA进行扩增。
3.4.6 PCR空白对照 PCR blank, negative reagent control
以水或不含目的DNA试剂进行PCR反应，以验证PCR反应过程中不被污染。
3.4.7 阴性假定对照 negative premise control
在样品检测整个操作过程中，敞开PCR反应体系，以证明检测的操作环境中不含有目的基因片段的污染。
3.4.8 阴性提取对照 negative extraction control
以水作为材料提取DNA，以证明DNA的抽提和制备过程中是否发生污染。
3.5 与探针相关的术语 Terms relative to probes
3.5.1 探针 probe
在引物之间的与目的片段特异性杂交的15—30bp寡核鼓苷酸链.
3.5.2 内部探针 internal probe
标记的内部探针。
3.5.3 内标准基因（内源参照基因） endogenous reference gene
具有植物物种专一性且拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守DNA序列。可用于对基因组中某一目的基因进行定量分析和验证PCR反应体系中是否存在抑制物质。
4原则
转基因生物及其产品的定性和定量PCR检测通常包括四个步骤：
――抽样
在一批物品中抽取具有代表性的材料，用于检测分析。
――样品DNA提取和纯化
样品DNA提取和纯化一般包括样品组织破碎、DNA释放和DNA从其他化合物中纯化等几个步骤。
――DNA扩增
对目的序列进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
――结果分析
