胰蛋白月示 -亚硫酸盐-琼脂培养基 (Tryptose Sulfite Agar)
用 途：
用于城市供水中滤膜法测定亚硫酸盐还原厌氧菌（梭状芽孢杆菌）孢子。（中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/T 149—2001）
原 理：
胰蛋白胨、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵为硫化氢指示剂；梭状芽孢杆菌将焦亚硫酸钠还原为硫化氢，与铁离子结果形成黑色沉淀。
配方（每升）：
胰蛋白月示 15g
大豆蛋白胨 5g
酵母膏粉 5g
焦亚硫酸钠（Na2S2O5） 1g
柠檬酸铁铵 1g
琼脂 15g
最终pH7.6±0.2
使用方法：
1、称取本品42g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃灭菌15分钟，待冷至50℃左右倾注平皿。
2、 滤膜灭菌
将滤膜放入烧杯中，置于沸水中煮沸灭菌三次，每次15分钟。前两次煮沸后需要更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。
3、 滤器灭菌
视滤器质地采用干热（酒精棉球火焰）或湿热灭菌。
4、 孢子的选择
水样在试验前须放置于水浴锅中，75±1℃加热15分钟。用同样的水样瓶作空白，用温度计检查加热温度。
5、 接种与培养
水样的过滤量要适当：对于饮用水、泉水、井水、海水、地面水和梭状芽孢杆菌轻度污染的水，取100mL过滤；对污染严重的水或废水，可用无菌水稀释后检测。调配一定的稀释度，使在滤膜上生长的黑色菌落分离，而更易于计数。
水样过滤后，用无菌镊子将滤膜过滤面朝下，置于培养皿中，同时使滤膜下无气泡。小心地将18mL约50℃的培养基倾注于培养皿中的膜上。在形成培养基层后，37±1℃培养20±4h和44±4h。如果使用厌氧培养箱，滤膜可放置在琼脂面上，且滤膜面向上。
6、 观察结果。
培养20±4h和44±4h后，计数所有黑色菌落。
7、 分析结果的表述
试验报告应说明所使用的方法，单位体积水样中亚硫酸盐还原厌氧细菌培养44±4h的孢子；孢子数太多，黑色菌落连在一起而难以计数，可采用20±4h培养时间的孢子大约数目。结果以CFU/100mL计。
质量控制：
质控菌株接种后于37±1℃培养24—48h，结果如下：
菌 名 菌 号 生长状况 培养特征
产气荚膜梭菌 HK9051 良好 黑色菌落
破伤风梭菌 HK9041 良好 黑色菌落
贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格：250g
参考文献:
1. CJ/T 149—2001中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水水质检验方法
