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紫外分光光度法测定紫云英蜜中总酚的含量

时间:2015/3/23 11:46:00 来源:网友

目的:建立紫云英蜜中总酚含量测定方法。方法:采用Folin酚法,样品经福林试剂显色反应后,紫外可见分光光度计测定其总酚含量。结果:总酚在2.03~8.04μg·mL-1内线性良好,r=0.9997,且平均回收率为102.42%,RSD=2.64%(n=5)。结论:该方法准确,简便,重现性好,专属性强,可有效地控制紫云英蜜的质量。

紫云英蜜又名红花草蜜或草子蜜,具有大自然清新宜人的草香味,甜而不腻,鲜洁清甜,色泽为浅琥珀色。富含多糖、多酚、氨基酸、维生素、微量元素等多种营养成分,长期饮用可补气血,健脾胃,增强抗病能力,强身健体。且其中的多酚酸具有抗病原微生物、抗炎症、抗变态反应、抗心血管疾病和抗氧化等作用[1,2]。为了控制产品质量,我们采用Folin酚法对贵州不同产地的紫云英蜜中总多酚含量进行了研究。

1仪器与试药

1.1仪器

紫外可见分光光度计(岛津2401);超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ2508型);恒温水浴锅(余姚市亚星仪器仪表有限公司)。

1.2试药

原儿茶酸对照品(批号:110809200503);钨酸钠,磷钼酸,85%磷酸,N a2CO3,以上试剂均为分析纯;水为蒸馏水;

1.3福林试剂的配制[3]:

称取钨酸钠40g,磷钼酸8g和85%磷酸20mL,溶于300ml蒸馏水,煮沸加热回流2h,冷却,稀释至400mL,置于棕色瓶中保存。

1.4Na2CO3溶液的配制

称取15gNa2CO3,溶于200mL蒸馏水中,即为75g·L-1Na2CO3溶液。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备

原儿茶酸对照品的配制:称取原儿茶酸对照品15.80mg于50mL容量瓶中,蒸馏水溶解并定容,摇匀,备用,浓度为316μg·mL-1。

2.2供试品溶液的制备

取同一批样品,精密称定,置于50mL容量瓶中,超声使溶,过滤,取20mL续滤液定容成50mL,摇匀,备用。

2.3测定方法

精密吸取适量样品溶液1mL于10mL带塞离心管中,加入2.5mL福林试剂,放置5min,再精密加入Na2CO3溶液2mL,50℃水浴保持5min,再取出室温放置2h,于760nm左右测定吸光度值。

2.4标准曲线的制备

从原儿茶酸标准储备液中分别吸取1,1.5,2,2.5,3,3.5mL于25mL容量瓶中,蒸馏水稀释定容,摇匀,浓度分别为12.64μg·mL-1,18.96μg·mL-1,25.28μg·mL-1,31.60μg·mL-1,37.92μg·mL-1,44.24μg·mL-1,分别从中精密吸取1mL,按2.3测定方法反应,测定吸光度值。以终浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,得回归方程为Y=0.0932X-0.0315,r=0.9997。结果表明总酚在12.64μg·mL-1~44.24μg·mL-1范围内线性良好。

2.5精密度试验

取同一份对照品按上述反应后连续测定5次,吸光度值RSD=0.386%。结果表明仪器精密度良好。

2.6样品吸光度值稳定性试验

按2.2供试品溶液制备方法制备样品液,并按2.3测定方法反应后,每隔5min测定一次,观察吸光度值变化,结果1h内的吸光度值RSD=1.42%,结果见图1。结果表明样品显色后在1h内较稳定。

2.7重现性试验

取同一批样品,平行5份,精密称定,按供试品溶液法制备,并按2.3测定法反应。结果表明,样品的平均含量为2.154mg·g-1,RSD=3.43%。结果表明方法重现性良好。

2.8加样回收率试验

取同一批样品,精密称定,精密加入337μg·mL-1原儿茶酸对照品2mL,按供试品溶液法操作,并按2.3测定样品中总酚的含量,结果表明,其回收率为102.42%,RSD=2.64%,数据见表1。表1总酚加样回收率试验结果(、略)

2.9样品含量测定

分别精密称取贵州不同产地的样品,每批平行取5份,按2.3测定方法操作,测定每批样品中总酚平均含量。结果见表2。表2不同批次样品总酚含量(略)

3讨论


植物多酚的测定方法有多种[3,4],曾考察普鲁士蓝法[5]、重氮比色法[6]等,均因为方法显色不稳定或方法步骤复杂而未采用。而Folin酚法实验操作较简单,且结果稳定可靠,故选用该方法作为紫云英蜜中总酚含量测定方法。


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