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用毛蚶加工生产维生素B12

时间:2009/6/10 13:44:00 来源:网友
    操作要点:①取新鲜毛蚶肉,蒸煮后绞碎,与其澄清后的煮汁一并使用,用硫酸调节至pH 2.5,煮沸0.5小时左右,滤去沉淀物。②向滤液中加1%的活性炭,搅拌2小时,滤去清液,滤液再用活性炭吸附1次,合并两次经过吸附的活性炭,加入2倍量的酸水搅拌15分钟,除去沾在活性炭上的杂质。滤去液体,用碳酸钠调节至pH 9.5,再加入1%的亚硝酸钠,加热搅拌2小时过滤。③洗脱液中加入1%亚硝酸钠和20%正丁醇不断搅拌,同时加热至60~70℃保持2小时,如溶液有大量蛋白质析出,将析出蛋白质滤去,再加入硫酸铵至饱和,搅拌并加热至65~75℃保持1小时。④静置,待液体分层后,分出正丁醇溶液,再用盐酸调节至pH 2.5,然后用0.1摩/升盐酸提取7~8次,将抽提液用碳酸钠调节pH为4.5~5.0。⑤将上述溶液用碳酸钠调节pH 8.5,在通风橱中缓慢加入0.7%氰化物,搅拌均匀后,置于暗处约5小时,氰化即可完成。⑥向氰化液中加入食盐,使溶液呈饱和状态,用酚-丁醇混合液抽提数次。二氰络合物即溶解于有机溶剂层。抽提液中加入等量三氯甲烷,充分搅拌,并用蒸馏水抽提。再在水抽提液中加入四氯化碳和蒸馏水抽提。最后水抽提液用乙醚洗涤,即得到较纯的玫瑰红溶液。⑦将两倍体积的丙酮加入活化后的氧化铝搅拌,静置。待氧化铝沉降倾出上层丙酮,另加入1倍体积丙酮,倒入层析柱中。向浓维生素B12溶液中加入3倍体积的纯丙酮混合均匀后,灌人层析柱。待全部溶液通过后,再以80%丙酮溶液洗涤吸附柱。在冲洗过程中,层析柱上即分离出不同颜色环,最上一环为黄褐色,第二环为橙红色,最下一环为桃红色,即为维生素B12。随着时间的延长,各环的分离也愈完全。在桃红色环降至层析柱2/3处时,改用50%丙酮水溶液洗脱,收集桃红色洗脱液,在水溶锅中加热浓缩至原体积的1/8。⑧在浓缩液中加入10倍量纯丙酮混合均匀,把溶液置于5℃冷库中放置2天,维生素B12 即逐渐结晶成玫瑰红色的针状或棱柱状的晶体,待母液的红色极淡时,倒出母液,用丙酮洗涤结晶数次,再用乙醚洗涤,在真空干燥箱中避光干燥。

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