表19 大肠菌群(MPN)检索表 (总接种量55.5mL,其中5份10mL水样,5份1mL水样,5份0.1mL水样)
接种量,mL MPN/100 mL 接种量,mL MPN/100
mL
10 1 0.1 10 1 0.1
0 0 0 0 1 0 1 4
0 0 1 2 1 0 2 6
0 0 2 4 1 0 3 8
0 0 3 5 1 0 4 10
0 0 4 7 1 0 5 12
0 0 5 9 1 1 0 4
0 1 0 2 1 1 1 6
0 1 1 4 1 1 2 8
0 1 2 6 1 1 3 10
0 1 3 7 1 1 4 12
0 1 4 9 1 1 5 14
0 1 5 11 1 2 0 6
0 2 0 4 1 2 1 8
0 2 1 6 1 2 2 10
0 2 2 7 1 2 3 12
0 2 3 9 1 2 4 15
0 2 4 11 1 2 5 17
0 2 5 13 1 3 0 8
0 3 0 6 1 3 1 10
0 3 1 7 1 3 2 12
0 3 2 9 1 3 3 15
0 3 3 11 1 3 3 17
0 3 4 13 1 3 5 19
0 3 5 15 1 4 0 11
0 4 0 8 1 4 1 13
0 4 1 9 1 4 2 15
0 4 2 11 1 4 3 17
0 4 3 13 1 4 4 19
0 4 4 15 1 4 5 22
0 4 5 17 1 5 0 13
0 5 0 9 1 5 1 15
0 5 1 11 1 5 2 17
0 5 2 13 1 5 3 19
0 5 3 15 1 5 4 22
0 5 4 17 1 5 5 24
0 5 5 19 2 0 0 5
1 0 0 2 2 0 1 7
表 19
接种量,mL MPN/100 mL 接种量,mL MPN/100mL
10 1 0.1 10 1 0.1
2 0 2 9 3 1 5 27
2 0 3 12 3 2 0 14
2 0 4 14 3 2 1 17
2 0 5 16 3 2 2 20
2 1 0 7 3 2 3 24
2 1 1 9 3 2 4 27
2 1 2 12 3 2 5 31
2 1 3 14 3 3 0 17
2 1 4 17 3 3 1 21
2 1 5 19 3 3 2 24
2 2 0 9 3 3 3 28
2 2 1 12 3 3 4 32
2 2 2 14 3 3 5 36
2 2 3 17 3 4 0 21
2 2 4 19 3 4 1 24
2 2 5 22 3 4 2 28
2 3 0 12 3 4 3 32
2 3 1 14 3 4 4 36
2 3 2 17 3 4 5 40
2 3 3 20 3 5 0 25
2 3 4 22 3 5 1 29
2 3 5 25 3 5 2 32
2 4 0 15 3 5 3 37
2 4 1 17 3 5 4 41
2 4 2 20 3 5 5 45
2 4 3 23 4 0 0 13
2 4 4 25 4 0 1 17
2 4 5 28 4 0 2 21
2 5 0 17 4 0 3 25
2 5 1 20 4 0 4 30
2 5 2 23 4 0 5 36
2 5 3 26 4 1 0 17
2 5 4 29 4 1 1 21
2 5 5 32 4 1 2 26
3 0 0 8 4 1 3 31
3 0 1 11 4 1 4 36
3 0 2 13 4 1 5 42
3 0 3 16 4 2 0 22
3 0 4 20 4 2 1 26
3 0 5 23 4 2 2 32
3 1 0 11 4 2 3 38
3 1 1 14 4 2 4 44
3 1 2 17 4 2 5 50
3 1 3 20 4 3 0 27
3 1 4 23 4 3 1 33
续表 19
接种量,mL MPN/100 mL 接种量,mL MPN/100mL
10 1 0.1 10 1 0.1
4 3 2 39 5 1 4 110
4 3 3 45 5 1 5 130
4 3 4 52 5 2 0 49
4 3 4 59 5 2 1 70
4 4 0 34 5 2 2 94
4 4 1 40 5 2 3 120
4 4 2 47 5 2 4 150
4 4 3 54 5 2 5 180
4 4 4 62 5 3 0 79
4 4 5 69 5 3 1 110
4 5 0 41 5 3 2 140
4 5 1 48 5 3 3 180
4 5 2 56 5 3 4 210
4 5 3 64 5 3 5 250
4 5 4 72 5 4 0 130
4 5 5 81 5 4 1 170
5 0 0 23 5 4 2 220
5 0 1 31 5 4 3 280
5 0 2 43 5 4 4 350
5 0 3 58 5 4 5 430
5 0 4 76 5 5 0 240
5 0 5 95 5 5 1 350
5 1 0 33 5 5 2 540
5 1 1 46 5 5 3 920
5 1 2 63 5 5 4 1600
5 1 3 84 5 5 5 >1600
52.1.5.2 可饮用的矿泉水 矿泉水出厂水或准备饮用的矿泉水,一般不应有污染,需要经常检验可按下法进行接 种。 推测性检验
52.1.5.2.1 用10mL的灭菌吸管向5支盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中,每管接种10mL水样。
52.1.5.2.2 置36±1℃培养箱中培养24h,观察每支管的产气情况,如有气体产生,则认为推测性检验阳性。 证实性检验
52.1.5.2.3 以下操作同矿泉水水源水检验。
52.1.5.2.4 MPN值的计算 例如经过证实性检验后,大肠菌群有3管阳性,从表20查得MPN为9.2/100mL。 表 20 用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果 组合的MPN值及其95%的可信限
阳性反应管数 MPN/100mL 95%可信限
下限 上限
0 0 0 6.0
1 2.2 0.1 12.6
2 5.1 0.5 19.2
3 9.2 1.6 29.4
4 16 3.3 52.9
5 >16 8.0 无限
52.2 滤膜法
52.2.1 测定范围 本法适用于大肠菌群的测定 。
52.2.2 方法提要 滤膜是一种微孔薄膜,孔径为0.45μm,能滤过大量水样,并将水中所含的细菌截留在 滤膜上,然后将滤膜贴在选择性鉴别培养基上,经37℃培养24h后,大肠菌群细菌在滤膜上长出具有特征性的菌落,直接计数典型菌落数,计算出每100mL水样中所含的大肠菌群数。
52.2.3 培养基和试剂
52.2.3.1 远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基
52.2.3.1.1 成分 蛋白胨10g 酵母浸膏5g 牛肉膏5g 乳糖10g 琼脂15～20g磷酸氢二钾3.5g 无水亚硫酸钠5g 5%碱性品红酒精溶液20mL 蒸馏水1000 mL
52.2.3.1.2 制法 储备培养基的制备: 先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另一500mL蒸馏水中,加入磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补足蒸馏水至1 000mL,混匀 后调PH为7.2～7.4,再加入乳糖,分装,115℃灭菌20min,储存于冷暗处备用。平皿培养基的配制: 将上法配制的储备培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红酒精溶液置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红酒精溶液内至深红色褪成 粉色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基15mL倒入已灭菌的空平皿内。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡粉色变成深红色,,则不能再用。
52.2.3.2 乳糖蛋白胨培养液
52.2.3.2.1 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水 1000mL
52.2.3.2.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于蒸馏水中加热溶解,调pH为7.2～7.4,再加入1mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,以115℃20min高压灭菌,储备冷暗处备用。
52.2.3.3 革兰氏染色法
52.2.3.3.1 结晶紫染色液 结晶紫1g 95%酒精20mL 1%草酸铵溶液80mL注:结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单一成分,易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用。
52.2.3.3.2 革兰氏碘液 碘1g 碘化钾2g 蒸馏水300mL 将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加入其余 的蒸馏水。注:当溶液由棕色变为淡黄色时即应弃去。
52.2.3.3.3 脱色剂:95%乙醇。
52.2.3.3.4 沙黄复染液 沙 黄 0.25g 95%酒精 10mL 蒸馏水 90mL 将沙黄溶解于酒精中,待完全溶解后加入蒸馏水。
52.2.3.3.5 染色法
52.2.3.3.5.1 将培养18～24h的培养物涂片。
52.2.3.3.5.2 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
52.2.3.3.5.3 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
52.2.3.3.5.4 滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止,约30s,水洗。
52.2.3.3.5.5 滴加复染剂,复染1min,水洗,待干,镜检。呈紫色者为革兰氏阳性菌;呈红色者为革兰氏阴性菌。
52.2.4 仪器
52.2.4.1 滤器。
52.2.4.2 滤膜:孔径为0.45μm,直径根据滤器规格,目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。
52.2.4.3 抽滤设备。
52.2.4.4 无齿镊子。
52.2.4.5 显微镜。
52.2.4.6 载玻片。
52.2.4.7 其他仪器同52.1.4。
52.2.5 检验步骤
52.2.5.1 先将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置沸水浴中煮沸灭菌3次,每次15min。前两次煮沸后需更换水,再蒸馏水洗涤2次,以除去残留溶剂。
52.2.5.2 用灭菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,加100mL水样,在负压0.5大气压下抽滤。
52.2.5.3 水样滤完后,取下滤器,用灭菌镊子夹住滤膜边缘部分,移放到远藤培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入37℃培养箱培养18～24h。
52.2.5.4 大肠菌群在远藤培养基上具有以下特征: 紫红色,具有金属光泽的菌落;深红色,不带或略带金属光泽的菌落;淡粉色,中心较深的菌落。 挑取可疑菌落涂片、染色、镜检。
52.2.5.5 凡系革兰氏阴性无芽胞杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液,经37℃培养24h后,如产酸产气则判定为大肠菌群阳性。
52.2.5.6 计算滤膜上的大肠菌群菌落数,以每100mL水样中的大肠菌群数报告之。
数出的总大肠菌群菌落数×100
每100mL水中大肠菌群菌落数＝──────────────- ………(97)
过滤的样品量(mL)
附 录 A 饮用天然矿泉水参考指标检验方法 (参考件)
A1 铍
A1.1 桑色素荧光分光光度法
A1.1.1 测定范围 本法适用范围为0.2～1.0μg/L,最低检测浓度为0.2μg/L。
A1.1.2 方法提要 铍在碱性溶液中与桑色素反应生成黄绿色的荧光化合物,测定荧光强度定量。低量的铍在pH5～8与乙酰丙酮形成可被四氯化碳萃取的化合物予以富集。
A1.1.3 试剂
A1.1.3.1 刚果红试纸。
A1.1.3.2 盐酸溶液50g/L,1mol/L和6mol/L三种浓度。
A1.1.3.3 氢氧化钠(40g/L):4g氢氧化钠溶于100mL纯水中。
A1.1.3.4 乙二胺四乙酸二钠溶液(100g/L):称取10g乙二胺四乙酸二钠,置于50mL烧杯内,加水溶解并稀释至100mL。移入玻璃瓶中保存。
A1.1.3.5 硼酸缓冲溶液:称取8g氢氧化钠和7.78g硼酸,置于400mL烧杯中,加纯水溶解后,稀释至200mL,移入玻璃瓶中在冰箱内保存。
A1.1.3.6 桑色素溶液(500μg/L):称取桑色素(3,5,7,2’,4’-五羟黄酮Ｃ15H10O7)50mg,溶于100mL无水乙醇或丙酮中,移入棕色瓶中,于冰箱中保存。
A1.1.3.7 乙酰丙酮－丙酮混合液(15＋85)。
A1.1.3.8 四氯化碳(重蒸馏)。
A1.1.3.9 无荧光纯水:去离子或蒸馏法制得的纯水加硫酸酸化后,投入高锰酸钾晶体一粒,重蒸馏。经测试应无荧光杂质。
A1.1.3.10 溴甲酚绿指示剂(1g/L)。
A1.1.3.11 铍标准贮备溶液(0.1mg/mL):称取0.196 8g硫酸铍(BeSO4·4H2O)于100mL容量瓶中,加盐酸溶液(A1.1.3.2)5mL溶解后,加纯水定容至刻度,移入玻璃瓶内,于冰箱中保存。此溶液1.00mL含0.10mg铍。
A1.1.3.12 铍标准使用溶液(1.00μg/mL):临用时吸取铍标准贮备溶液(A1.1.3.11)5.0 mL于500mL容量瓶中,定容,混匀,此溶液1.00mL含1.00μg铍。
A1.1.4 仪器
A1.1.4.1 荧光分光光度计。
A1.1.4.2 1 000mL分液漏斗。
A1.1.4.3 50mL蒸发皿。
A1.1.5 分析步骤
A1.1.5.1 吸取20mL水样,置于25mL具塞比色管中,以刚果红试纸(A1.1.3.1)为指示,用盐酸溶液(A1.1.3.2)和氢氧化钠溶液(A1.1.3.3)调节溶液pH值至刚果红试纸呈红紫色,加乙二胺四乙酸二钠溶液(A1.1.3.4)1.0mL,混匀,加缓冲溶液(A1.1.3.5)2.5mL,混匀,与标准系列同时加入桑色素试剂(A1.1.3.6)0.12mL,加纯水至刻度,混匀,40min后在激发波长430nm,狭缝5nm,发射波长530nm,狭缝10nm条件下测定荧光强度。
A1.1.5.2 校准曲线的制备:于6支25mL具塞比色管中分别加入铍标准使用溶液(A1.1.3.12)0,0.10,0.30,0.50,0.70和1.00mL,加纯水至20mL刻度,以后步骤同A1.1.5.1,以荧 光强度和浓度绘制校准曲线。
A1.1.5.3 低含量铍的富集方法:量取水样500mL,置于1000mL分液漏斗中,另取1000mL分液漏斗6支,各加水500mL,于上述分液漏斗中分别加入0,0.1,0.3,0.5,0.7,1.0mL铍标准使用溶液(A1.1.3.12),混匀,于水样中及标准中各加10% 乙二胺四乙酸二钠溶液(A1.1.3.4)10mL,混匀。加5滴溴甲酚绿指示剂(A1.1.3.10),用50g/L盐酸(A1.1.3.2)和氢氧化钠溶液(A1.1.3.3)调节pH值至溶液呈蓝绿色为止。加乙酰丙酮－丙酮混合液(A1.1.3.7)10mL,混匀,放置5min,加入20mL四氯化碳(A1.1.3.8)。振摇提取2min。静置分层,收 集四氯化碳层于蒸发皿中。再用10mL四氯化碳提取1次,合并四氯化碳于上述蒸发皿中。加2mL 6mol/L盐酸溶液(A1.1.3.2),在水浴上蒸干,取下蒸发皿,加1mol/L盐酸溶液(A1.1.3.2)1mL和热纯水2mL溶解残渣并转移至25mL具塞比色管中,用热纯水洗蒸发皿数次,合并洗液于比色管中,加水至约20mL,以下步骤按A1.1.5.1操作。
A1.1.6 计算
m
ρ(Be)=─── ……………………………………(A1)
V
式中:ρ(Be)--铍的质量浓度,mg/L; m--从校准曲线上查得的水样中铍的含量,μg; V--水样体积,mL。
A1.2 铝试剂分光光度法
A1.2.1 测定范围 本法最低检测浓度为5μg/L。 水中铝、钴、铜、铁、锰、镍、钛、锌及锆含量不太大时可加入EDTA隐蔽。铜含量超超过10mg/L必需增加EDTA量。铜与铝试剂络合物在515nm处也有吸收,必要时可在标准系列中加入与样品中同样量的铜予以校正。含有机铍的水样可分解后进行测定。
A1.2.2 方法提要 在乙酸缓冲液中铝试剂与铍生成红色染料,于515nm处测量吸光度定量。
A1.2.3 试剂
A1.2.3.1 EDTA溶液(25g/L):称取2.5g乙二胺四乙酸,置于250mL烧杯中,加入30mL纯水溶解后,加1滴甲基红乙醇溶液(0.5g/L),用氢氧化铵中和至中性,然后用纯水稀释至100mL。
A1.2.3.2 铝试剂缓冲溶液:称取250g乙酸铵,置于1L烧杯中,加入500mL纯水,40mL冰乙酸,搅拌使完全溶解,必要时可过滤。溶解0.5g铝试剂(金精三羧酸铵,aurintricaboxyl- icacid triammoniumsalt)于25mL纯水中,并加入上述缓冲溶液。称取1.5g苯甲酸,溶于10mL甲醇,边搅拌边加入上述缓冲液中。另取5g明胶,置于250mL烧杯中,加125mL纯水,于沸水浴内加热使完全溶解,倾入含有250mL纯水的500mL容量瓶中,冷后加纯水至刻度,混匀后将上述铝试剂缓冲液和明胶溶液合并,贮存于硬质棕色瓶中,于冷暗处保存。
A1.2.3.3 铍标准贮备液(1.00mg/mL):称取9.82g硫酸铍(BeSO4·4H2O)于100mL纯水中,必要时可过滤,转入500mL容量瓶中,加入纯水定容至刻度,转入玻璃瓶中保存。此溶液1.00mL含1.00mg铍。
A1.2.3.4 铍标准使用液(5.00μg/mL):吸取5.00mL铍标准贮备液(A1.2.3.3),置于1000mL容量瓶中,加纯水定容至刻度,混匀。此溶液1.00mL含5.0μg铍。
A1.2.4 仪器 分光光度计,515nm波长,5cm比色皿。
A1.2.5 分析步骤
A1.2.5.1 样品保存:一般的水样每升加入1.5mL硝酸(ρ20=1.42g/mL),使pH为2,以防止铍在容器壁的吸附。当水样中有颗粒物存在,而仅分析可溶性铍时,可将水样先经0.45 μm滤膜过滤后,再加入硝酸酸化。
A1.2.5.2 吸取0,0.10,0.50,1.00,2.00,3.00和4.00mL铍标准使用液(A1.2.3.4),分别加至7支100mL容量瓶中。
A1.2.5.3 吸取50mL或适量样品(铍含量低于200μg)于100mL容量瓶中。
A1.2.5.4 向样品及标准系列中加入EDTA溶液(A1.2.3.1)2mL,加纯水稀释至约75mL。加15mL铝试剂缓冲溶液(A1.2.3.2),用纯水稀释至100mL刻度,充分混匀后在暗处放置20min,必要时可以过滤。于515nm处,用5cm比色皿测定吸光度,绘制校准曲线,从校准曲线上查出样品中铍的含量。
A1.2.6 计算
m
ρ(Be)=─── …………………………………(A2)
V
式中:ρ(Be)--样品中铍的质量浓度,mg/L; m--从校准曲线上查得的样品中铍的含量,μg; V--水样体积,mL。
A2 硫化物
A2.1 对二乙氨基苯胺分光光度法
A2.1.1 测定范围 本法适用于含量低于1mg/L的饮用天然矿泉水及其瓶装水中硫化物的测定。本法最低检测量为0.5μg。若取50mL水样,则最低检测浓度为0.01mg/L。亚硫酸盐超过40mg/L,硫代硫酸盐超过20mg/L时,对本法有干扰。水样有颜色或者浑浊时亦有干扰,应分别采用沉淀分离或曝气分离法消除干扰。
A2.1.2 方法提要 硫化物与对二乙氨基苯胺及三氯化铁作用,生成稳定的可溶性亚甲蓝染料。颜色的 深浅与硫化物含量成正比。
A2.1.3 试剂
A2.1.3.1 乙酸锌溶液(220g/L):称取22g乙酸锌［Zn(CH3COO)2·2H2O］溶于纯水,并稀释至100mL。
A2.1.3.2 氢氧化钠溶液［c(NaOH)=1mol/L］:称取40g氢氧化钠溶于纯水中,并稀释至1000mL。
A2.1.3.3 对二乙氨基苯胺溶液(7.5g/L):称取0.75g对二乙氨基苯胺硫酸盐［(C2H5)2NC6H4NH2·H2SO4］溶于50mL纯水中,加硫酸溶液(1＋1)至100mL,混匀,保存于棕色瓶中。
A2.1.3.4 氯化铁溶液(1 000g/L):称取100g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于纯水中,并稀释至100mL。
A2.1.3.5 抗坏血酸溶液(100g/L):称取1.0g抗坏血酸溶于纯水中,并稀释至10mL。此溶液临用时配制。
A2.1.3.6 碘溶液［c(1/2I2)=0.1mol/L］:称取碘化钾40g,加纯水25mL溶解,再加碘13g,搅拌使完全溶解,用纯水稀释至1000mL,滴加3滴浓盐酸,盛于棕色瓶中,保存在暗处。
A2.1.3.7 碘溶液［c(1/2I2)=0.01mol/L］:由0.1mol/L碘溶液(A2.1.3.6)稀释10倍而得。
A2.1.3.8 乙二胺四乙酸二钠溶液［c(EDTA-2Na)=0.01mol/L］:称取3.7gEDTA-2Na(C10H14N2O8Na2·2H2O)和4.0g氢氧化钠溶液溶于纯水,并稀释至1000mL。
A2.1.3.9 淀粉溶液(5g/L):称取0.5g可溶性淀粉,用少量纯水调成糊状,用刚煮沸的纯水稀释至100mL,冷却后加0.1g水杨酸或0.4g氯化锌。
A2.1.3.10 混合试剂:取对二乙氨基苯胺溶液(A2.1.3.3)和氯化铁溶液(A2.1.3.4)按10∶0.5混匀, 临用时现配。
A2.1.3.11 硫代硫酸钠标准溶液［c(Na2S2O3)=0.1000mol/L］:称取25g硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)溶于煮沸放冷的纯水中,并加水稀释至1000mL。加0.4g氢氧化钠或0.2g无水碳酸钠,贮存在棕色瓶内,可保存数月。按下述方法标定浓度。取碘酸钾(KIO3)在105℃烘烤1h,置于硅胶干燥器内冷却30min,准确称取两份各约0.15g,精确至0.0001g,分别放入250mL碘量瓶中。各加100mL纯水,待碘酸钾溶解后,各加3g碘化钾,10mL冰乙酸,在暗处静置10min,用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定,至溶液呈淡黄色时,加入1mL5g/L淀粉溶液(A2.1.3.9),继续滴定至蓝色褪去为止。记录硫代硫酸钠溶液的用量,并按下式计算出硫代硫酸钠溶液的浓度。
m
c(Na2S2O3)=─────- ………………………(A3)
V×0.035 67
式中:c(Na2S2O3)--硫代硫酸钠溶液的浓度,mol/L; m--碘酸钾的质量,g; 0.035 67--与1.00mL硫代硫酸钠标准溶液［c(Na2S2O3)=1.000mol/L］相当 的以克表示的碘酸钾的质量; V--硫代硫酸钠标准溶液的用量,mL。 两次标定结果之间相差不得大于0.2%。
A2.1.3.12 硫代硫酸钠溶液［c(Na2S2O3)=0.010mol/L］:取经过标定的硫代硫酸钠溶液(A2.1.3.11),用煮沸冷却的纯水稀释成0.0050mol/L的标准溶液。
A2.1.3.13 硫化物标准贮备液(0.1mg/mL):取硫化钠晶体(Na2S·9H2O),用少量纯水清洗表面,并用滤纸吸干。称取0.2～0.3g,用煮沸放冷的纯水溶解并定容至250mL(临用前制备并标定)。此溶液1mL约含0.1mg硫化物(S--)。标定方法如下: 取5mL乙酸锌溶液(A2.1.3.1)于250mL碘量瓶中,准确加入10.00mL硫化钠溶液(A2.1.3.13)及20.00mL碘溶液(A2.1.3.7),同时用纯水代替硫化钠溶液作空白试验。各加5mL(1＋9) 盐酸溶液,摇匀,于暗处放置15min。加30mL纯水,用硫代硫酸钠标准溶液(A2.1.3.12)滴 定,至溶液呈淡黄色时,加1mL 5g/L淀粉溶液(A2.1.3.9),继续滴定至蓝色消失为止。按下式计算每毫升硫化物溶液含S--的毫克数。
(V1-V2)×C×16
ρ(S--)=─────────………………………………(A4)
10
式中: ρ(S--)--硫化物的质量浓度,mg/mL; V1--空白所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL; V2--硫化钠溶液所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL; c--硫代硫酸钠溶液的浓度,mol/L; 16--与1.00mL硫代硫酸钠标准溶液［c(Na2S2O3)=1.000mol/L］相当的以 克表示的S--的质量。
A2.1.3.14 硫化物的标准使用溶液(10.0μg/mL):取一定体积的硫化钠标准贮备溶液(A2.1.3.13),加乙酸锌溶液(A2.1.3.1)1mL,用煮沸放冷的纯水定容至50mL,制成1.00mL含10.0μgS--的标准使用液。此溶液保存于冰箱中,可使用数日,每次使用前充分混匀。
A2.1.4 仪器
A2.1.4.1 250mL碘量瓶。
A2.1.4.2 50mL具塞比色管。
A2.1.4.3 125mL磨口洗气瓶。
A2.1.4.4 高纯氮气钢瓶。
A2.1.4.5 分光光度计。
A2.1.5 采样 在500mL干净的硬质玻璃瓶中,加入1mL220g/L乙酸锌溶液(A2.1.3.1)和1mL氢氧化钠 溶液(A2.1.3.2),然后注入水样(近满,留少许空隙),盖好瓶塞,反复摇动混匀,密封,带回实验室测定。
A2.1.6 分析步骤(适用于清洁水样)
A2.1.6.1 取均匀水样(A2.1.5)适量(含S**2-小于10μg),用纯水稀释至50mL。
A2.1.6.2 取50mL比色管7支,各加纯水约40mL,再加硫化物标准使用液(A2.1.3.14)0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8和1.0mL,加纯水至刻度,混匀。
A2.1.6.3 向水样管和标准管各加1.0mL显色剂(A2.1.3.10),立即摇匀,放置20min。
A2.1.6.4 以纯水作参比,用3cm比色皿于665nm处测定样品和标准系列溶液的吸光度。
A2.1.6.5 绘制校准曲线,从曲线上查出样品中硫化物含量。
A2.1.7 计算
m
ρ(S--)＝───- …………………………………(A5)
V
式中: ρ(S--)--水样中硫化物(S--)的质量浓度,mg/L; m--从校准曲线上查得样品中硫化物(S--)的含量,μg; V--水样体积,mL。
A2.1.8 精密度和准确度 3个实验室测定水源水,回收率为95%～103%,平均相对标准偏差为5.6%。
A2.2 碘量法
A2.2.1 测定范围 本标准适用于含量大于1mg/L的饮用天然矿泉水及其瓶装水中硫化物的测定。
A2.2.2 方法提要 水中硫化物与乙酸锌作用,生成碘化锌沉淀,将此沉淀溶解于酸中,在酸性溶液中,硫离子与标准碘液反应,然后用硫代硫酸钠滴定过量的碘。
A2.2.3 试剂
A2.2.3.1 氢氧化钠溶液［c(NaOH)＝1mol/L］:称取40g氢氧化钠(NaOH)溶于纯水中并稀释至1000mL。
A2.2.3.2 碘溶液［c(1/2I2)＝0.025mol/L］:由A2.1.3.6碘溶液稀释。
A2.2.3.3 盐酸(ρ20＝1.10g/mL)。
A2.2.3.4 硫代硫酸钠标准溶液［c(Na2S2O3)＝0.025mol/L］:由A2.1.3.11贮备溶液稀释。
A2.2.3.5 淀粉溶液(5g/L):同A2.1.3.9。
A2.2.4 仪器
A2.2.4.1 250mL碘量瓶。
A2.2.4.2 25mL滴定管。
A2.2.5 采样 同A2.1.5。
A2.2.6 分析步骤
A2.2.6.1 定量取混匀的水样,用滤纸过滤,以纯水洗涤滤纸和沉淀物。
A2.2.6.2 将沉淀物连同滤纸置于250mL碘量瓶中,用玻璃棒将滤纸捣碎,加50mL纯水及10.00mL碘溶液(A2.2.3.2)(应保持有碘的颜色,如碘溶液褪色应定量补加)。另取50mL纯水和滤纸作空白试验。
A2.2.6.3 分别加入5mL浓盐酸(A2.2.3.3),暗处放置10min,用硫代硫酸钠标准溶液(A2.2.3.4)滴定过量的碘,至溶液呈淡黄色时,加入1mL淀粉溶液(A2.2.3.5),继续滴定至蓝色刚消失为止,记录硫代硫酸钠标准溶液的用量。
A2.2.7 计算
(V1－V2)×c×16
ρ(S--)=─────────── ……………………(A6)
V
式中: ρ(S--)--水样中硫化物的质量浓度,mg/L; V1--空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL; V2--水样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL; V--水样体积,mL; c--硫代硫酸钠标准溶液浓度,mol/L; 16--与1.00mL硫代硫酸钠标准溶液［c(Na2S2O3)＝1.000mol/L］相当的以克为单位的S--的质量。
A3 磷酸盐
A3.1 测定范围 本法测定10mg/L以下的磷酸盐(HPO4--)。
A3.2 方法提要 在强酸性溶液中,磷酸盐与钼酸铵作用生成磷钼杂交酸,能被还原剂(氯化亚锡等) 还原,生成蓝色的络合物,当磷酸盐的含量较低时,其颜色强度与磷酸盐的含量成正比。
A3.3 试剂
A3.3.1 钼酸铵-硫酸溶液:向约70mL纯水中缓缓加入28mL浓硫酸,稍冷,加入2.5g钼酸铵。待固体完全溶解后,用纯水稀释至100mL。
A3.3.2 氯化亚锡溶液(50g/L):加热溶解5g氯化亚锡(SnCl2·2H2O)于5mL浓盐酸中,用纯水稀至100mL(此试剂不稳定,现用现配)。
A3.3.3 活性炭:不含磷酸盐。
A3.3.4 磷酸盐标准溶液［ρ(HPO4--)＝0.01mg/mL］:称取0.7165g在105℃干燥的磷酸二氢钾(KH2PO4),溶于纯水中,并定容至1000mL,吸取10.0mL,用纯水准确定容至500mL,此溶液1.00mL含0.01mg磷酸盐(HPO4--)。
A3.4 仪器
A3.4.1 50mL具塞比色管。
A3.4.2 分光光度计。
A3.5 分析步骤
A3.5.1 如果水样混浊或带色时,可事先在100mL水样中加入少量活性炭,充分振摇1min,用中等密度干滤纸过滤后,再行测定。
A3.5.2 取50mL水样,置于50mL比色管中,加入4mL钼酸铵-硫酸溶液(A3.3.1),摇匀。加入1滴氯化亚锡溶液(A3.3.2),再摇匀,10min后目视比色或于650nm波长处测其吸光度。
A3.5.3 分别吸取每毫升含磷酸盐0.01mg的标准溶液(A3.3.4):0,0.50,1.00,2.00, 4.00,6.00,8.00,10.00mL,置于50mL比色管中,加纯水至50mL,然后按水样测定步骤进行,目视比色或绘制校准曲线。
A3.6 计算
m×1000
ρ(HPO4--)＝────── …………………(A7)
V
式中: ρ(HPO4--)--水样中磷酸盐的质量浓度(HPO4--),mg/L; m--从校准曲线上查出的水样中磷酸盐的含量,mg; V--所取水样的体积,mL。
A3.7 精密度和准确度 同一实验室对含HPO4-- 1.2mg/L的加标水样经7次测定,其相对标准偏差为8.3%,相 对误差为6.6%。
A4 气体
A4.1 测定范围 本法适用于饮用天然矿泉水中溶解或逸出的氦(He)、氢(H2)、氧(O2)、氮(N2)、氩 (Ar)、甲烷(CH4)、一氧化碳(CO)、二氧化碳(CO2)、硫化氢(H2S)等气体的测定。本法最小检测浓度以体积分数计分别为:氦5×10**-5、氢5×10**-5、二氧化碳5× 10**-4、硫化氢5×10**-4、甲烷5×10**-4、氮8×10**-5、一氧化碳5×10**-4、氩5 ×10**-4、氧8×10**-5。
A4.2 方法提要 由排水集气法采集的逸出气体或由真空脱气法采集的溶解性气体样品,注入色谱 仪,在载气携带下流经色谱柱后得以分离,随后进入热导检测器被检测。由所记录的色谱图中各组分的峰高(或峰面积)用外标法即可求得各组分的体积分数。
A4.3 试剂和材料
A4.3.1 氢气(H2):99.999%。
A4.3.2 氦气(He):99.9999%。
A4.3.3 氮气(N2):99.999%。
A4.3.4 氧气(O2):99.999%。
A4.3.5 氩气(Ar):99.999%。
A4.3.6 二氧化碳(CO2):99.999%。
A4.3.7 甲烷(CH4):纯度已知。
A4.3.8 一氧化碳(CO):纯度已知。
A4.3.9 硫化氢(H2S):纯度已知。
A4.3.10 混合标准气体Ⅰ:根据仪器的灵敏度和线性范围,取不同体积的氢气(A4.3.1)、氦气(A4.3.2)、氧气(A4.3.4),以氩气(A4.3.5)为"溶剂"混合配制。
A4.3.11 混合标准气体Ⅱ:根据仪器的灵敏度和线性范围,取不同体积的氮气(A4.3.3)、氧气(A4.3.4)、氩气(A4.3.5)、甲烷(A4.3.7)、一氧化碳(A4.3.8),以氢气(4.3.1)为"溶剂"混合配制。
A4.3.12 混合标准气体Ⅲ:根据仪器的灵敏度和线性范围,取不同体积的二氧化碳(A4.3.6)和硫化氢(A4.3.9),以氢气(A4.3.1)为"溶剂"混合配制。
A4.3.13 5A分子筛:40～60目,在300℃活化4h,置干燥器中保存。
A4.3.14 402高分子多孔微球:40～60目。
A4.3.15 105型催化剂:40～60目。
A4.3.16 不锈钢色谱柱:内径4mm,长3m。
A4.4 仪器
A4.4.1 气相气谱仪:配热导检测器。
A4.4.2 集气管:250mL。
A4.4.3 进样器:100μL和1mL。
A4.5 分析步骤
A4.5.1 色谱条件
A4.5.1.1 分离氦气(He)、氢气(H2)、氧气(O2)的色谱条件 a. 色谱柱:不锈钢柱(A4.3.16); b. 固定相:5A分子筛(A4.3.13); c. 载气:氩气(A4.3.5); d. 载气流量:100mL/min; e. 柱温:室温; f. 汽化室温度:室温; g. 检测器温度:室温; h. 热导检测器桥电流:130mA。
A4.5.1.2 分离氧气和氩气(O2＋Ar)、氮气(N2)、甲烷(CH4)、一氧化碳(CO)的色谱条件 a. 色谱柱:不锈钢柱(A4.3.16); b. 固定相:5A分子筛(A4.3.13); c. 载气:氢气(A4.3.1); d. 载气流量:100mL/min; e. 柱温:55℃; f. 汽化室温度:55℃; g. 检测器温度:70℃; h. 热导检测器桥电流:180mA。
A4.5.1.3 分离氩气(Ar)的色谱条件 a. 色谱柱:不锈钢柱(A4.3.16); b. 固定相:5A分子筛(A4.3.13)＋105型催化剂(A4.3.15)**1); c. 载气:氢气(A4.3.1); d. 载气流量:50mL/min; e. 柱温:50℃; f. 汽化室温度:110℃; g. 检测器温度:110℃; h. 热导检测器桥电流:180mA。
A4.5.1.4 分离二氧化碳(CO2)、硫化氢(H2S)的色谱条件 a. 色谱柱:不锈钢柱(A4.3.16); b. 固定相:402高分子多孔微球(A4.3.14); c. 载气:氢气(A4.3.1); d. 载气流量:40mL/min; e. 柱温:室温; f. 汽化室温度:室温; g. 检测器温度:室温; h. 热导检测器桥电流:180mA。
A4.5.2 测定
A4.5.2.1 按A4.5.1设定色谱条件,待仪器稳定后,用进样器取适量**2)气样注入色谱柱内,记录色谱图,测量峰高(或峰面积)。注:**1)在色谱柱的前段装15～20cm105型催化剂,其余部分装5A分子筛,使用前在高温下活化,而后在180℃通氢气以还原催化剂。**2)由各气体成分含量而定。
A4.5.2.2 用进样器取适量混合标准气体(A4.3.10、A4.3.11或A4.3.12)注入色谱柱内,记录色谱图,测量峰高(或峰面积)
